抗真菌药物敏感试验心得.ppt

抗真菌药物敏感试验
沈永年
概述
真菌感染的发病率,尤其是深部真菌感染的发病率逐
渐增高
大量新型抗真菌药物不断涌现
■临床耐药菌株的出现
抗真菌药物敏感实验为临床耐药菌株的发现,
抗真菌药物的选择提供指导
概述
抗真菌药物敏感实验方法是建立在抗细菌药物敏感实验方法基础之上
由于真菌是一种高等的生物,其繁殖方式、生长周期、生长条件等均与
细菌不同,因此抗真菌药物敏感试验一直是国内外学者研究的难题。因
此,实验方法多样化,但尚无通用的标准方法。
美国国家临床试验标准委员会( NCCLS)从1992年起,制订了一系列针
对抗真菌药物敏感实验的指导性文件,但目前仍不能适用于所有医学真
菌的检测。
抗真菌药敏试验目的
指导抗真菌药物的选择
测定抗真菌药物对致病真菌的敏感性,提供临床用
药量及预后监测的参考
筛选耐药菌株及硏制对致病真菌有效的抗真菌药物
提供临床应用
常见术语
最低抑菌浓度( minimal inhibitory concentration,MIC
MIC50, MIC90, MIC50%80%
■最低杀菌浓度( minimal fungicidal concentration mFc)
MFC5O, MFC90
■最低有效浓度( minimal effective concentration,MEC)
抗真菌药敏试验方法
药基法
琼脂稀释法
试管(液体)稀释法
微量液体稀释法
■菌基法(琼脂扩散法)
ROSCO抗真菌药敏纸片法
E试验法(E-test)
酵母样真菌药物敏感试验
酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感试验于1992年由美国国家
临床试验标准化委员会( NCCLS)提出标准实验方案(M27
P)以来,几经修订,目前已由M27-A2取代。此外,其
他药物敏感试验方法如琼脂稀释法,琼脂扩散法,E试验法
等时有应用。
试管液基稀释法( NCCLS-M7A
药液的制备
储存液:浓度至少为1280μg/mL或10倍于受试的最高浓度。储存
液浓度需根据药物本身溶解性决定
氟康唑和5氟胞嘧啶(5一F℃)以灭菌蒸馏水溶解;酮康唑、伊
曲康唑、两性霉素B、伏力康唑等采用DMSO溶解
储存液分装后置一60℃保存。解冻后的储存液应在24h内使用,不
得重复冻存使用。
试管液基稀释法 NCCLS-M27A
药液的制备
使用液:水溶性药物以无菌蒸馏水将储存液倍比稀释
至工作液浓度(10倍测试浓度)
非水溶性药物则需将储存液用DMSO倍比稀释至100倍测
试浓度,再釆用无菌蒸馏水稀释至工作液浓度(10倍测试浓
度),以防止药物的析出。