核酸的分离纯化及鉴定.ppt

表的制
RNA
Ribonucleic acid
敏的制备(分离、化)
(一)总论
二)DNA的分离纯化
(三)核畯的进一步纯化(聚乙二醇、氯化
铯梯度离心)
(四)总RNA的纯化
(五)反转录
(一)资
同题:
■分高核酸的基本依据、方
法?
核酸分高主要卿要注的
是什么?
DNA和RNA分高时的主要差
别?
不同的生物体中,核酸
所处的环境不尽相
核酸与蛩白质结合紧
密程度不同。
2、DNA与RNA含量有差
核酸分子量大小有差
别,
由于核酸性质基本相同
生物体所组成的成分基
本相同。因此,对于不
同的生物体核酸的分高
方法相差不大。
Nii
N NHS
0-P-0-
o→P0
脱氧鸟苷-3,5-双磷酸南
脱氲胞肀-3-磷酸酯
腺苷一5-磷酸南
■以上是常见核苷酸结构。中
Nih
性PH下的高子状的钠盐形
■组分和结构决定性质。性质
是分商的基础。
核酸的结构特点
分子巨大,有共扼双键、氢键、苷键、和磷酸二
酯键,自由氨基、磷酸基。
■核酸的二级结构:DNA双螺旋结袍;RNA大多为单
链。链的许多区域或自身发生回折,回折区内的
多核苷酸段垦螺旋结构。
A,DNA主6分千的双螺结构哪少pNA的
核酸性质
质与其结构和组分是密切相关的
分于量大小:RNA和DNA的分子量都很大。RNA分子
104-106或者更大。×106-×109。
性状和溶解度:DNA多为白色纤维状固体。RNA为白色
粉來。都微溶于水。他们的钠盐在水中溶解度較大
都溶于2-甲氧乙醇,但不溶于一般有机溶剂(如:乙
醇、乙飇、氯仿、戊醇和三氯醋酸等)。
吸收光:具有共扼双的嘌呤和嘧啶。故皆具有独
特的紫外吸收光谱。核酸在240260n的紫外波段有
强烈的吸收峰。最大吸收值在260n附近。通过
OD/OD2的比值可判断样品的纯度。
纯DNA的OD260D280=,
纯RNA的OD260D280=
核醱中若含杂蛋白或苯酚则比值明显降氐。
对于纯核酸样品只要读出260nm的0值。即可算出含
量,通常
1OD20=50ug/ml(双螺旋DNA)
1OD20=40ug/ml(单螺旋DNA或RNA)
10D26=20ug/ml(寡核苷酸)。
:加热、强酸碱或射缆及一物可破坏核酸分子
鎚的处理。变性后的核酸化性
会有显著变化,最量要表现为粘下同
解:;酸、嘁、核酸酶都可使核酸不同程度的降解。
变性后表现
A260值增加
■粘度下降
浮力密度增大
分子量不变