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细胞培养操作规范
细胞培养的基本条件
:
细胞培养间消毒
a:使用前紫外照射20-30分钟
b:使用完75%酒精擦拭台面,紫外照射15
分钟
C:每两周用84消毒液擦拭地面、台面一次的
方式进行消毒
超净工作台
使用前
开启柜内紫外灯照射15-30分钟
使用时
开启鼓风,在台面内操作
使用完毕后
要用75%酒精将台面和台内四周擦拭干净,紫
外照射10分钟。
co2培养箱:
1设定的条件为37℃,5%C02。
2使用CO2培养箱应注意的问题
用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证
通
保持培养箱内空气干净,定期消毒擦拭。
箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000毫升
,以保持箱内湿度。
控制水盘内污染的方法
1、定期(至少每两周一次),更换水盘内的无菌
蒸馏水或无菌去离子水。
2、在水盘内添加适量硫酸铜,预防真菌污染。
配制方法:20g无水硫酸铜+5ml浓硫酸+1L
灭菌纯水。
3、水盘内添加适量抗生素。
4、定期为培养箱(含水盘)进行一次高温灭菌

细胞培养器皿:
细胞培养瓶:
25平方厘米(加液量3-5m|)
75平方厘米(加液量10-15m
150平方厘米(加液量40m)
细胞培养板:
培养器皿底面积加培养液量可获细胞量
96孔培养板032

105
4孔培养板2

5×105


10
×106
细胞培养皿
35mm(加液量3m)
a60mm(加液量5m)
100mm(加液量10m|)
150mm(加液量15m)
■常用培养基:
RPMI1640:
适合许多种细胞,如肿瘤细胞、正常细胞的原代培
养、传代培养等。
尤其适合人白细胞,如H9、HL-60、IM-9和K
562等细胞系的培养
DMEM:
DMEM(A)【不含谷氨酰胺、可高压灭菌】
DMEM(H)【含谷氨酰胺、高糖型(4500mg/L
)、除菌过滤灭菌】
DMEM(L)【含谷氨酰胺、低糖型(1000mg/L)
除菌过滤灭菌】
■血清:
常用血清种类:胎牛血清、新生牛血清、小牛血
血清的灭活(消除补体活性)56℃,30分钟。
使用浓度:5%-20%,一般10%
血清的消毒:过滤除菌
血清解冻步骤:-20℃或-70℃至4℃冰箱溶解
天,至室温下全溶后再分装,一般用15m无菌
离心管分装。
谷氨酰胺:
谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4℃C放置1周可分
解50%,故应单独配制,置于-20℃保存,临
用前加入培养液