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含油污泥中石油降解菌
的分离及其降解特性
资源微生物实验室
姓名：马腾飞
时间：11月9日
导师：晁群芳
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第二
第三
第四
研究内容
材料方法
结果讨论
研究结论
汇报内容
第一
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一、研究内容
石油降解菌的分离
菌株的鉴定
最适降解条件
降解特性研究
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二、材料与方法


含油污泥样品来源于渤海油田钻井岩屑，取自中海油渤海公司环保技术服务分公司，经测定油泥的含水率为70. 55 % ，pH为6. 4,盐度3. 0%。

富集分离培养基
斜面固体培养基
含油液体培养基
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利用富集培养基和斜面培养基对菌种进行分离纯化培养。将分离纯化培养得到的菌株使用扫描电镜进行形态观察。

菌株采用16S rRNA基因序列分析的方法鉴定到属。

采用单因素实验进行操作，分别改变温度、盐度和pH条件进行培养。
（TPH）的降解
TPH的测定采用超声萃取—紫外分光光度法测定。

用二氯甲烷萃取添加菌液处理7d的含油污泥，用于硅胶柱层析，分别用30 mL正己烷、50 mL正己烷-二氯甲烷(体积比1:1)洗脱，所得到的饱和烃、芳香烃组分用事先称重的圆底烧瓶接取。计算石油烃降解菌对饱和烃和芳香烃的降解率。
然后将称重后的芳香烃和饱和烃组分用适量正己烷完全溶解，旋转蒸发至适量后氮吹至1 mL装入样品瓶进行GC—MS检测。
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三、结果与讨论

从含油污泥样品中分离纯化得到3株石油烃降解菌，编号为RS1，RS2和RS3。 通过扫描电镜观察RS1为椭圆形，RS2和RS3为短杆状。

测定结果显示3株细菌的16sRNA基因序列长度分别为1422、1433和1415bp。将得到的基因序列与GenBank数据库中的序列进行比对，获得各序列的同源性信息（表1）。
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由图1可以看出，RS1在实验所选的温度范围内对石油均有超过10%的降解，其降解的最适温度范围为27 ~42℃，37℃时其对石油降解率最高;RS2降解的最适温度范围为32 ~37 ℃，32℃时RS2对石油降解率最高;RS3在42℃时石油降解率最高，其降解的最适温度范围为32 ~ 42℃ 。
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由图2可以看出，RS1对盐度的适应性较好，在盐度为0. 5%~5%的环境下对石油烃具有25%以上的降解率;% ~3%。在5%的较高盐度条件下，只有RS1的降解率依然高于25 % 。
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pH对降解率的影响如图3所示，可以明显看出RS3在碱性环境下对石油烃的降解效果远远好于其他两株菌，其降解的最适pH范围可达6~10 ，RS1和RS2只适应中性环境，降解的最适pH范围均为6~8。
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相对于只添加营养的对照组，实验组油泥TPH均有明显降低，RS1, RS2和RS3作用于油泥，TPH的降解率分别为39. 69% ,31. 13%%，而混合菌的降解效果明显高于单一菌株，% 。3株菌对TPH的降解均在实验进行到20 d左右开始趋于缓慢。如图4所示。
本实验结果也表明，混合菌的降解效果明显好于任何单一石油烃降解菌株。
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