【实验】测定土壤中微生物的数量.ppt

【玄物/k
课题2
土壤中分解尿素的
细菌的分离与计数
尿素是一种高浓度氮肥,属中性速效肥料,也可用于
生产多种复合肥料。在土壤中不残留任何有害物质,
长期施用没有不良影响。尿素经过土壤中细菌的脲酶
作用,分解成氨后,才能被作物吸收利用。因此,尿
素要在作物的需肥期前4~8天施用。
名画标
尿素
两个主要目的
(1)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌;
(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。
尿素分子的立体结构
CO(NHL2+H2O原
一→CO2+2NH
妍宽路
(一)筛选菌株
美国微生物学科布鲁克1966
年发现耐热细菌,从水生耐
热细菌Taq得到耐高温的Taq
DNA聚合酶。
美国黄石国家公团的一个热泉
一、研究思路
(一)筛选菌种
实例:耐高温的DNA聚合酶
PCR技术:要求使用耐高温(93
的DNA聚合酶。
Taq细菌
耐高温的酶心耐高温生物体守找高温环境(热泉、火山口)
筛选原因:因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数澈生物,
使耐热的1细菌保霤下来。
启示:亭批目的种时要据它对生存环壇的要求,副
的环境中安孚找。
2实验室中微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温
度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长
KHPO

NaH,PO4

MgSoa 7H,O

葡萄糖
100g
尿素

琼脂
150g
思考:
该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮
源的分别是什么物质?
碳源:葡萄糖、尿素
02氮源:尿素
此配方能否筛选出产生脲酶的细菌?为什么?
配方以“尿素为唯一氮源”,只有产生脲酶的细菌才能利用
尿素作为氮源而生存
3选择培养基:
在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同
时抑制或阻止其他种类徹生物生长的培养基。
结果:培养一定时间后,该菌数量上升,再通过稀释涂
布平板等方法对它进行纯化培养分离
如何对细菌进行计数?
1显微镜直接计数:
利用血球计数板(血细胞
计数板),在显微镜下
计算一定容积里样品中
微生物的数量。
没有染色时,死的和活的
菌体都能统计,实验结果010m0
苏食药监械
偏大。
字2005第
2400309号
2稀释涂布平板法(间接计数)
1mL
1mL
1 mL
103
10
菌
液
ymL
gml
稀释液稀释液稀释液稀释液稀释液稀释液
涂布平板操作
涂布器
②
(不
),滴加
到培养基表面。


匀地涂布在培养基表
有酒精的烧杯中。
3,将沾有少量酒精的涂布器在火焰上面。涂布时可转动培养
引燃,待酒精燃尽后,冷却8~10s。皿,使菌液分布均匀