细胞培养无菌操作技术李伟 1无菌操作技术的意义?体外培养细胞缺乏抗感染能力,所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。?即便使用设备完善的实验室,若实验者粗心大意,技术操作不规范,也会导致污染。?因而,为在一切操作中最大可能地保证无菌,每一项工作都必须做到有条不紊和完全可靠。 2【培养前准备】?在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。?有关数据的计算要事先做好。?根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒。这可以避免开始实验后,因物品不全往返拿取而增加污染机会。 3【洗手和着装】?原则上和外科手术相同。?在利用超净台工作时,应彻底洗手,要戴口罩、着消毒衣帽,并于开始操作前用 75% 酒精消毒手套。?如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手,换新的口罩、消毒衣帽。 4手套的正确带法 5手套的正确带法 6手套的正确带法 7【操作野消毒】?超净工作台台面每次实验前要用 75%酒精擦洗。然后紫外线消毒 30min 。?在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线。?消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置,否则会遮挡射线降低消毒效果。?一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用 75% 酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。 8【器皿消毒】?需要的器皿均应在使用前放入超净台紫外灭菌。?所有用到的器皿(买时已灭菌的除外)都必须经过高压灭菌烘干后,才能放入超净台内。?已灭菌的、外包装完好的培养瓶、离心管、冻存管等可以表面经过 75% 酒精擦拭后直接放入超净台。 9【操作注意事项】手消毒与烧灼?双手戴手套后,必须经过 75% 酒精全面消毒才能接触超净台和培养箱。双手接触外部物件后均应重新消毒。?超净台经过 30min 紫外灭菌后,才能打开通风装置。?开始工作的第一步就是点燃酒精灯。以后一切操作,如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等,都需在火焰近处并经过烧灼进行。?烧灼的时间保持适当的长度,如果是玻璃器皿可以稍长一点,如果是塑料器皿,也应保持 5s以上,同时要保证烧灼是全方位的。比如, 360 度旋转瓶口、从吸管的末端开始等。必要时,可以反复重复烧灼。 10
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