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琼脂糖凝胶电泳检测DNA
丁新伦
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【一】背景知识
凝胶电泳是分离和纯化DNA片段最常用的技术；
分离、鉴定和提纯核酸首选的标准方法。
根据制备凝胶的材料:
琼脂糖电泳
凝胶
电泳 聚丙烯酰胺电泳
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【二】实验目的
学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法
检测碱裂解法提取质粒的结果
检测双酶切法鉴定重组质粒的结果
检测PCR法鉴定重组质粒的结果
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【三】实验原理
（1）某物质在电场作用下的迁移速度叫做电泳的速率，电泳的速率与核酸分子大小和构型有关。
DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。分子质量越小跑得越快，紧密构型快于松散型开环分子或线性分子，从而可以分离大小不同的DNA或RNA分子。
（2）琼脂糖是一种线性多糖聚合物，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。
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琼脂糖浓度(%)
线型DNA分子的分离范围(Kb)

5～60

1～20

～10

～7

～6

～3

～2
配制多大浓度的琼脂糖凝胶，要根据被检的DNA
分子大小来确定。
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（3）溴化乙锭为扁平状分子，在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其荧光强度与DNA的含量成正比。据此可判断DNA分子量大小和粗略估计样品DNA浓度。
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琼脂糖是一种线性多糖聚合物。
浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。
琼脂糖浓度(%)
线型DNA分子的分离范围(Kb)

5～60

1～20

～10

～7

～6

～3

～2
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【四】仪器、材料与试剂
质粒样品、酶切样品和PCR样品。
凝胶电泳系统和电泳图像分析系统(凝胶成像系统)等。
琼脂糖、 1XTBE电泳缓冲液、溴化乙锭、 6X载样缓冲液 （ 6X loading buffer）和DNA分子量标准（ Lambda DNA / EcoRI + HindIII Marker ）等。
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凝胶电泳系统
DYY-6C型  双稳定时电泳仪电源（北京六一） 输出范围（显示分辨率）：6-600V(1V)      4-400mA (1mA)      240W
美电泳槽Mini-Sub Cell GT Cell
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凝胶成像分析系统
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