7 小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞 细胞生物学实验.ppt

实验六、小鼠巨噬细胞吞噬实验六、小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象观察鸡红细胞现象观察??实验目的实验目的??实验原理实验原理??仪器、材料与试剂仪器、材料与试剂??实验步骤实验步骤??实验报告及思考题实验报告及思考题?下一次实验预告细胞生物学实验细胞生物学实验实实验验目目的的通过观察小鼠巨噬细胞吞噬鸡红通过观察小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验,了解巨噬细胞对异物的吞细胞实验,了解巨噬细胞对异物的吞噬功能,了解吞噬在机体噬功能,了解吞噬在机体非特异性非特异性免免疫疫中的重要作用。中的重要作用。小鼠巨噬细胞吞噬羊红细胞小鼠巨噬细胞吞噬羊红细胞实实验验原原理理在高等动物中,单核吞噬细胞系统和嗜中性粒细胞专负在高等动物中,单核吞噬细胞系统和嗜中性粒细胞专负责吞噬功能,在细胞的非特异性免疫功能中发挥重要作用。责吞噬功能,在细胞的非特异性免疫功能中发挥重要作用。单核吞噬单核吞噬系统系统包括血液中的单核细胞和组织中固定和游走包括血液中的单核细胞和组织中固定和游走的巨噬细胞。的巨噬细胞。当病原物或其他异物侵入机体时,能招引巨噬细胞, 当病原物或其他异物侵入机体时,能招引巨噬细胞, 并响应招引因子招引,使巨噬细胞产生活跃的变形运动, 并响应招引因子招引,使巨噬细胞产生活跃的变形运动, 主动向异物移行,当接触到异物时,即伸出主动向异物移行,当接触到异物时,即伸出伪足伪足,将其包,将其包围内吞入胞质,形成吞噬体,继而巨噬细胞质中的围内吞入胞质,形成吞噬体,继而巨噬细胞质中的初级溶初级溶酶体酶体与吞噬泡融合,形成与吞噬泡融合,形成异噬溶酶体异噬溶酶体,在溶酶体酶的作用,在溶酶体酶的作用下,杀死病原物并将其消化分解。只有这种活化的巨噬细下,杀死病原物并将其消化分解。只有这种活化的巨噬细胞才具有较强的吞噬能力,具有胞才具有较强的吞噬能力,具有非特异抗感染和抗肿瘤非特异抗感染和抗肿瘤作作用。吞噬细胞的吞噬活动大致分趋化、吞噬和胞内杀灭作用。吞噬细胞的吞噬活动大致分趋化、吞噬和胞内杀灭作用三阶段用三阶段。。小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞仪器、材料与试剂仪器、材料与试剂仪器仪器光学显微镜,低速离心机,冰箱,高压灭菌锅,电光学显微镜,低速离心机,冰箱,高压灭菌锅,电子天平。子天平。材料材料小鼠, 小鼠, 1% 1%鸡红细胞悬液,解剖器械一套,无菌注射鸡红细胞悬液,解剖器械一套,无菌注射器( 器( 1mL 1mL ), ), 吸管,小试管,载玻片,盖玻片,小染吸管,小试管,载玻片,盖玻片,小染缸。缸。试剂试剂( (1 1) )Alsever Alsever ’’s s血细胞保存液,( 血细胞保存液,( 2 2) )% % 生理生理盐水,( 盐水,( 3 3) )4% 4%台盼蓝染液, 台盼蓝染液, 75% 75% 酒精,( 酒精,( 4 4) )6% 6%淀淀粉肉汤粉肉汤 P56-57 P56-57 (煮沸灭菌冰箱保存) (煮沸灭菌冰箱保存) , ,用时融化用时融化, ,加加 4% 4%台盼蓝染液混匀呈蓝色。台盼蓝染液混匀呈蓝色。小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实实验验步步骤骤??在实验前在实验前 1-4 1-4 天,用无菌注射器取已灭菌的天,用无菌注射器取已灭菌的 6% 6%淀粉溶液淀粉溶液 1mL 1mL 注射于小鼠的腹腔内。注射于小鼠的腹腔内。?? 1-4 1-4 天后实验时注射天后实验时注射 1% 1%鸡红细胞悬液鸡红细胞悬液 1mL 1mL 于小白鼠腹腔内, 于小白鼠腹腔内, 并轻揉腹部使鸡红细胞分散。并轻揉腹部使鸡红细胞分散。?? 20-30min 20-30min 后,每后,每 3 3人做1只老鼠,将小鼠拉颈处死(方法: 人做1只老鼠,将小鼠拉颈处死(方法: 右手抓住鼠尾,左手拇指与食指向下按住鼠头用力向后右手抓住鼠尾,左手拇指与食指向下按住鼠头用力向后拉, 拉, 使脊髓和脑髓间断开致死。) 使脊髓和脑髓间断开致死。) ??用解剖剪剪开腹膜,把内脏推向一侧,用尖吸管吸出腹用解剖剪剪开腹膜,把内脏推向一侧,用尖吸管吸出腹腔液置于清洁小试管内。腔液置于清洁小试管内。??每人取一张干净的载玻片,滴一滴腹腔液, 每人取一张干净的载玻片,滴一滴腹腔液, 推开制片、推开制片、干燥,盖上盖玻片,置显微镜下观察干燥,盖上盖玻片,置显微镜下观察。。??镜检:先用低倍镜找出吞噬现象好的视野,再换高倍镜镜检:先用低倍镜找出吞噬现象好的视野,再换高倍镜观察,先分辨清鸡红细胞与巨噬细胞?分别能看到小鼠观察,先分辨清鸡红细胞与巨噬细胞?分别能看到小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞不同吞噬阶段的图象形态, 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞不同吞噬阶段的图象形态, 动态连贯起来就有了吞噬全过程。动态连贯起来就有了吞噬全过程。实实验验报报告告及及思思考考题