白念珠菌药物敏感性试验及氟康唑相关耐药基因点突变的的分析研究.pdf

天津医科大学硕+学位论文中文摘要目的了解白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的体外药物敏感性。收集白念珠菌氟康唑耐药株,检测相关耐药基因ERGI l、TACl、MRRl和UPC2的点突变,进一步了解ERGIl、TACI、MRRl和UPC2的点突变与唑类药物耐药之间的关系。方法收集不同来源临床标本,通过芽管形成试验、显色培养基和厚膜孢子试验鉴定白念珠茵。,进行白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的体外药物敏感性试验。收集氟康唑耐药株,采用尿素裂解法提取DNA,PCR 扩增及测序。对于ERGll,设计一对引物,测其全长;对于TACI设计三对引物, 分别包括5个点突变T225A、A736V、N972D、N977D和G980E:对于MRRI,设计两对引物,分别包括2个点突变P683S和G997V:对于UPC2,设计一对引物, 包括2个点突变A643T和G648D。将PCR产物送交商业测序。结果共收集白念珠菌临床株506株。% (502/506),%(1/506),%(3/506);%(219/506),%(269/506),耐药率为 %(18/506);其中1株白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑交叉耐药。对于ERGll, 11株白念珠菌氟康唑耐药株的9株中检测出了错义突变导致的8种氨基酸置换(%),分别是E266D(n=5)、D116E(n=3)、Y132H(n=2)、G448E(n=2)、 Y132F(n=I)、K143Q(n=1)、T229A(n=I)和G464S(n=I)。其中K143Q此前未见文.. 献报道。对于UPC2,11株菌中的2株检测出了错义突变导致的1种氨基酸置换(%),G648D(n=2)。对于TACl和MRRl,11株菌中均未检测到相应的点突变。结论白念珠菌对唑类药物有耐药及交叉耐药现象,伊曲康唑耐药率高于氟康唑。但白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑大多数菌株敏感而耐药株少,仍然可以用于临床上白念珠菌感染的治疗。伊曲康唑剂量依赖敏感的菌株较多,临床治疗时可以考虑加大用药剂量,以提高治疗效果。ERGll点突变与耐药的关系比较明确,但菌株突变的数目或分布模式都没有明显的规律性。TACI、MRRl和UPC2 的点突变与耐药的关系有待于进一步研究。白念珠菌对唑类药物耐药是多种分子机制共同作用的结果,因此今后应进一步探索和完善耐药产生的机制,为临床提供参考和理论依据。关键词:白念珠菌氟康唑ERGI TACl MRRI UPC2点突变天津医科大学硕士学位论文 Abstract lobjectivel Candida albicans were collectedandidentifiedfromclinicalspecimens, toinvestigate thesusceptibility ofC albicans isolatestofluconazole anditracon钇ole. ClinicalC albicans strainsresistant tofluconazole werecollected,and were detected point mutations ofERG 1,TAC 1,MRR I,and UPC2 gene,in order tobetter understand therelationship betweenpoint mutations ofERG l,TAC I,MRR1,and UPC2 andresistance toazoles. IMethodsl C albicanswere collectedfromclinicalspecimens and wereidentifiedby germ tubeformationtest,CHROMagar medium,and ehlamydospore formation test. M27-A2 Brothmicrodilution method wasused to assess thesusceptibility ofclinical C albicans toflucon配ole ,1 fluconazole-resistant strains DNA by urea pyrolysismethod,and acquired target ERG gene,three fragments ofTAC gene including T225A,A73 6V,N972