实验题目:血红蛋白测定与红细胞计数
检验诊断学教研室 张群智 教授
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实验目的要求:
通过血红蛋白测定、红细胞计数实验要求:
1、掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方法及注意事项。
2、掌握血细胞计数板的结构
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一、血红蛋白测定(Hemoglobin简称Hb)
(氰化高铁血红蛋白法)
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【原理】
血红蛋白中的亚铁离子(Fe2+)被高铁氰化钾氧化成高离子(Fe3+),血红蛋白转化成高铁血红蛋白,高铁血红蛋白与氰离子(CN-)结合,生成稳定的氰化高铁血红蛋白。用光电比色计在540nm波长比色。从HicN参考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。
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【操作】
取试剂5毫升加入血液20ul混匀置5分钟后用721光电比色仪,540nm波长,试剂为空白调0点比色,读取光密度,查标准曲线得结果。
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红细胞计数(red blood cell简称RBC)
——显微镜直接计数(试管法)
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【原理】
一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后,充入血细胞计数池中显微镜下计数一定容积内的细胞,再换算成每升标本的细胞数报告。
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【操作方法】
l、,放入一小试管内。
2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。
3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内,吸上清液嗽洗吸管2-3次,立即摇匀。
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4、用玻棒取混悬液少量,充入计数池内。
5、待2—3分钟,让红细胞完全下沉后,将计数板平放在显微镜台上,用低倍镜观察,如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。
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红细胞计数的区域:
中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。
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