2020年高效液相色谱.ppt

基本原理
高效液相色谱法原理
当采用一种或多种测试方法不能直接确定混合物中特定或全部组份的组成或含量时，需要分离后再进行测定。
基于混合物中各组分与流动相和固定相作用力存在差异使得它们在色谱柱中停留时间不同而完成分离。
主要分离机理：分配、吸附
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基本原理
色谱图(chromatogram)
色谱峰
保留时间(tR)
死时间(t0)
相对保留时间(tR′)
峰面积(A)
峰高(h)
峰宽(W)
T(min)
S(mV)
tR
t0
tR′
A
h
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色谱图：是指被分离组分的检测信号随时间分布的图象。色谱峰：组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线，流出曲线上的突起部分。 保留时间(tR)： 被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也既从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间，用tR表示，常以分（min）为时间单位。死时间(t0) ：从进样到峰出现极大值的时间称为死时间。
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0
选择性
分离度
色谱柱塔板数
保留因子
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基本原理
保留因子
k = (tR – t0)/t0
= tR′/t0
分离因子α
α= k2/k1
流动相组成；
色谱柱；
温度
色谱柱长短；
流动相流量
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分离度考虑了保留时间和峰宽度，是一个综合指标：
R < 两峰明显重叠
R = %分离
R  两峰完全分开
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基本原理
不对称度 ＝ B/A
拖尾因子 ＝ (B + A)/2A
不对称度与拖尾因子
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小结
色谱法研究的核心：
选择最适合的色谱体系和条件、在最短的时间达到最佳的分离效果。
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基本原理
固定相重量
流动相重量
色谱理论
1、塔板理论
目的：从理论上得到描述色谱流出曲线的方程，并通过
这一方程各参数来研究影响分离的因素。
假设 （1）色谱柱存在多级塔板;
（2）组分通过时在每级塔板两相间达 到一次平衡;
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基本原理
理论塔板数N的计算
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