2021年高效液相色谱.ppt

高效液相色谱法
高效液相色谱法（HPLC）是以
经典液相色谱法为基础，引入了气
相色谱的理论与实验方法，流动相
用高压泵输送，采用高效固定相和
在线检测等手段发展而成的分离分
析方法 。
高效液相色谱
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特点：高压、高效、高速
高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
溶质在液体中的扩散系数比气体中约小105倍
液体粘度比气体约大102倍
液体表面张力比气体约大104倍
液体密度比气体约大103倍
液体不可压缩
一、高效液相色谱法的特点
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二、高效液相色谱法的应用
与气相色谱法相比具有：适用范围
广，样品预处理简单，分离效率高，流
动相选择范围广，检测方法多为非破
坏性的，流出组分可回收等优点。
高效液相色谱法主要用于化合物
的分离、鉴定、纯化以及定量。
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三、高效液相色谱法的几种类型
HPLC
液-固吸附
液-液分配
正相色谱
反相色谱
一般反相色谱
离子对色谱
离子抑制色谱
离子交换色谱
一般离子交换色谱
离子色谱
氨基酸分析
凝胶色谱
凝胶渗透色谱
凝胶过滤色谱
键合相色谱
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四、高效液相色谱仪
检测器
高压泵
脱气装置
色谱柱
进样阀
流动相
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多用柱塞往复泵，柱塞向前运动，液体输出，流向色谱柱；向后运动，将贮液瓶中液体吸入缸体。如此往复运动，将流动相 源源不断地输送到色谱柱中。柱塞往复泵属于恒流泵，流量不受柱阻影响，泵压最高为400kg/cm2。
这种泵具有清洗容易，更换流动相方便等优点，但脉动性较大是其缺点。目前多采用双泵补偿法来克服这一问题。
输液泵
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避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。
例：硝酸、硫酸、盐酸、卤化物，四氯
化碳与异丙醇或四氢呋喃的混合物，含
强络合剂的溶液等。
过滤——用滤膜过滤或垂熔漏斗过滤
脱气——采用超声或过滤的方法
注意
流动相
使用前
使用含酸、碱、缓冲液的流动相后，
必须用不含盐的有机溶剂-水冲洗！
冲洗
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注意——在安装过程中将废液管接口的方向调正确
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