表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究.pdf

南昌大学医学院
硕士学位论文
表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验
研究
姓名:彭燕
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:杨慧
20090601
摘要采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损创面,。∫虼瓷说仍蛑乱馔饬鞑牡娜焉芰涮ザし舯瓯荆靡鹊白酶和联合消化法分离表皮,用Ⅳ型胶原快速粘附法分离纯化人表皮干细胞,以含表皮生长因子、角质细胞无血清培养液等组成的表皮干细胞培养基进行体外培养,测定克隆形成率。票竿严赴嫫そ逋馀嘌娜吮砥じ上胞接种到脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤。⌒挛骼及淄贸9制作背部全层皮肤缺损创面随机分为四组,橛煤砥じ上赴淖橹こ唐し移植于皮肤缺损创面;橛煤侵氏赴淖橹こ唐し粢浦灿谄し羧彼鸫疵妫橛玫ゴ客严赴嫫ひ浦灿谄し羧彼鸫疵妫籇组用创面空置为对照。观察创面修复情况,局部炎症反应,创面愈合时间。各组分别于术后在部分创面取材行常规染色和.、甉免疫组织化学染色观察。体外培养的人表皮干细胞增殖稳定,克隆形成率明显高于角质细胞对照组。制备脱细胞真皮柔软有韧性,染色显示已去除表皮,真皮内未见细胞及碎屑存在,胶原排列规则。表皮干细胞接种于脱细胞真皮后增殖良好,染色可见较多的细胞分布于真皮支架中。含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较角质细胞对照组明显缩短。.免疫组化染色显示四组均有表达,其中楸泶镒钋浚珺组表达次之,楹虳组表达最弱。蛎庖咦榛旧ǎ核淖榫斜泶铮渲蠦组表达最强,楸泶锎沃珻组及楸泶锝先酢以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮目的方法结果结论肤缺损创面的修复治疗。
关键词:表皮干细胞;脱细胞真皮;人工皮肤;创面愈合;皮肤移植;ⅲ產:摘要.
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第一章前言烧伤、糖尿病溃疡、肿瘤切除术后等原因常造成皮肤组织缺损,目前多采胞体外培养构建组织工程皮肤修复皮肤缺损的国内外文献报道,为大面积皮肤础。表皮干细胞为皮肤组织特异性干细胞,具有自我更新、强大增殖和分化潜能,是皮肤修复、重建的关键性源泉。表皮干细胞通过表达整合素来实现其对使种子细胞纯度较高,免疫原性较低。同时选择组织相容性好、抗原性弱的真皮支架材料亦属十分重要。.、.等炎性介质,引起机体损伤【ⅰ.可直接损伤内皮细胞、增加血管通透性,也可通过刺激内皮细胞合成释放一些是目前发现的最强的内皮源性缩血管多肽,在炎症中引起各器官血管收缩,血流量下降导致器官病变。甉所具有的广泛生物学效应,可导致移植物缺血用自体皮肤和皮瓣移植方法修复,取得了促进皮肤创面愈合的较好效果。但对于大面积烧伤等广泛皮肤缺损患者而言,由于缺乏可移植的自体皮肤而使创面修复困难,影响了患者皮肤屏障功能及外观,甚至危及生命。异体皮肤移植由于免疫排斥反应的存在,仅用作暂时封闭创面的覆盖物。因此,进一步寻找新的皮肤替代物用于创面修复具有重要的临床意义。近几年来陆续有采用表皮细缺损患者提供了新的治疗手段和途径5环矫姹砥は赴逋馀嘌币子谒老、增殖能力有限,培养至应用的周期较长,难以在较短的时间内获得充足的皮源来及时覆盖广大缺损的创面;另一方面作为组织工程皮肤的种子细胞和真皮支架