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关于中压柱的知识点★中压制备柱色谱经典柱色谱与低压柱色谱的分辨率一般还是有限的,因为它们所用的分离材料的颗粒一般比较大。如果要进一步提高制备色谱的分辨率, 通常只有进一步减小材料的颗粒或者增加色谱柱的长度, 这样无疑会增大色谱柱的阻力及降低流动相的流速。另外, 不同的冲洗溶剂所造成的流动相流速也有很大差别,如采用正相,以环己烷作为流动相时,流动相的流速较快;而采用反相, 以水作为流动相时,则流速较慢,使用一些黏度较大的有机溶剂,如正丁醇也有同样的结果。为进一步提高制备色谱的分辨率又能保证有较快的分离速度,使用中压制备色谱是行之有效的办法。中压柱色谱与经典柱色谱或低压柱色谱相比需要更多的组件,最简单的配置是除色谱柱外,再加上一台能够提供几十公斤压力的恒流泵。中压柱色谱的工作原理是由恒流泵输送移动相,通过进样阀上样,在色谱柱对样品进行分离后,利用检测器检测, 记录仪记录, 并同时收集各个馏分。在实际工作中, 往往并不一定需要购置成套的装置, 而是根据自己的研究需要和经费状况, 分别购置适宜的组件自己组装。中压制备柱色谱一般由下面最主要的几个部件组成。恒流泵中压制备柱色谱除色谱柱外,唯一不能省掉的就是恒流泵。恒流泵的类型很多,从高效液相常规使用的泵到蠕动泵,都是恒流泵,也即都能以恒定的流量输出液体。所不同的是高效液相使用的泵通常要求最高压力能达到 40MPa ,最大流量达到 10mL/min, 流量的精确度和准确度也要求很高。低压柱色谱恒流泵压力为 - , 中压柱色谱对泵的要求则介于二者之间。一个恒流泵能达到的压力越高,输出流量的精确度和准确度要求也越高,在实验室购买恒流泵时,主要考虑的是其能达到的最大压力最大流量,其次才是精确度和准确度。目前使用的恒流泵多数是柱塞式往复泵。色谱柱多数情况下中压制备色谱的色谱柱都是由耐压的强化玻璃制成, 并且都是由自己装填柱子, 最常用的分离材料颗粒的大小为 15-25 微米和 25-40 微米。在中压柱色谱中,湿法填充技术除使用一般的经典柱色谱的湿法填充外,对于颗粒较小,如小于 20 微米的分离材料通常采用匀浆法进行装柱。最简单的干法装柱是按照一般的干柱色谱法装填好色谱柱然后将装好的色谱柱与一氮气瓶相连,打开氮气瓶开关及色谱柱出口,使氮气瓶输出压力在 ,利用高压气体将填料压紧。该法装填的柱子密度比湿法至少提高 20% ,因而更有利于分离难分离物质。检测器检测器的使用可以使样品的收集变得有的放矢, 根据检测器信号的变化可以进行及时的收集, 检测器的检测范围, 检测器的灵敏度,基线稳定性等参数决定了仪器的性能高低。自动馏分收集器和进样阀在配置较为完备的中压制备色谱中, 一般都有自动馏分收集器和进样阀。自动离分收集器有两种模式, 一种是间隔一定的时间收集,一种是间隔一定的流出滴数而自动调换收集。中压柱色谱的操作方法与经典柱色谱基本相似,下面以植物红豆杉中抗癌成分紫杉醇的分离为例来说明它的具体操作。紫杉醇是最早由美国 Wani 等于 1971 年首先从短叶红豆杉的茎皮中分离出来的, 1979 年美国的 Horwitz 等发现良好的抗癌活性和独特的抑微管解聚和稳定微管的作用机理。 1992 年美国药品与食品管理局正式批准作为治疗晚期卵巢癌的药物首次上市,临床还发现对肺癌,头颈部肿瘤,恶性黑色素瘤等具