微生物酶法转化DL-ATC合成L-半胱氨酸相关酶系研究.pdf

南开大学
博士学位论文
微生物酶法转化DL-ATC合成L-半胱氨酸相关酶系的研究
姓名:刘忠
申请学位级别:博士
专业:微生物学
指导教师:杨文博
20040418
±茎圭壁一查茎垄兰堡主芏堡垒查要摘饲料工业。从土壤筛选获得了一株假单胞菌,可转化—〉揭恢昕勺;,培养小时后的菌株,%;确定了摇瓶酶源细胞培养的最佳产酶话腚装彼崾且恢种匾5暮虬被幔惴河τ糜谝揭⑹称贰⒒逼芬约胱氨酸。本研究从菌株鉴定、产物的鉴别、产酶及酶促反应条件、关键酶的分离纯化、酶学性质以及转化酶基因的克隆和表达等方面进行了研究,研究结果如下:株,利用形态学特征、生理生化特征、%、蛄型葱对菌株进行了初步分类鉴定,结果表明该菌株可能属于恶臭假单胞菌能将酶法转化生成的产物氧化后利用阳离子交换树脂进行了分离纯化,得到装彼峤峋АC复俜从蟮牟锞刃舛取咱匣奶匾煨苑从Α值、∩嫌τ培养条件为:培养基初始一,培养温度。∑孔耙毫,振荡速率/:利用砑腜瓸杓品ê投蜗煊γ娣治法对酶源细胞培养的培养基进行优化,得到了各因素的最佳水平值。在优化条件下经发酵罐培养实验表明,:,.,两个酶的最适反应温度均为℃,最适反应值分别为和甇,均为嗜中温性酶,并用薄层层析法证明纯化后的狝水解酶可以转化—蒐—化后的甋酰胺水解酶可转化甋生成话腚装彼帷然后以大肠杆菌J芴寰匦鹿菇═甑幕蜃镈的随半胱氨酸的重组菌株。对重组质粒械牟迦肫谓行蛄胁舛ǎ⒍圆够利用.;。、.孜锱ǘ疞时,、凝胶过滤和离子交换等手段分离纯化得到电泳纯的狝在~的范围内有较好的稳定性。V捣直鹞./福畲蠓从λ俣确直鹞./为载体,以大肠杆菌为受体菌,构建了菌株的基因组袂狗ㄋ婊目猓煅橹っ魑目饩哂薪虾玫耐暾院痛硇浴机文库,并建立特异性的筛选模型,从文库中筛选到一株可转化∞狝为和/以.
关键词:腚装彼幔阜ㄗ;俚グ琇水解酶,奔柞#甃一半胱物为瓵水解酶,编码的产物为甋酰胺水解酶。在分子水平上证明了在菌株中,从酶法转化合成话腚装彼峋璼一代的途径进行。序结果进行分析发现,在的插入片段中有两个开放阅读框架和,长度分别为和,分别编码龊个氨基酸。针对构建两个重组质粒蚿.;针对构建两个重组质粒和’甇蚿。将重组质粒直鹱;蟪Ω司鶥盏己蠓⑾种刈橹柿V械腛均能够得到很好地表达;⑾,—蚩寺。复炕中英文摘要南开大学博士学位论文’
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八第一章文献综述腚装彼岬姆肿咏峁话腚装彼岬睦砘灾省腚装彼甤是组成蛋白质的种氨基酸中的一种,属于脂肪族氨基酸。在蛋白质中腚装彼岢R云溲趸偷腖一胱氨酸形式存在,¨】,其结构式与立体结构式见图屯。,而在中性及碱性溶液中易被空气氧化为胱氨酸,:化学名称:分子式:相对分子质量:比旋光度:】/颜色:异臭,味酸溶解性:易溶于水,微溶于乙醇熔点:南开失学博士学位论文呈味性:稳定性:文献综述半胱氨酸的立体结构半胱氨酸的结构式图℃猚
腚装彼岬挠τ残基间以二硫键甋—连接,使蛋白质具有稳定的空间立体结构【。话化学反应性:由于话腚装彼岵嗔瓷系嫩匣一院芮浚有所有氨基酸能够发生的化学反应外,还有一些特殊的化学反应:肼被槿绲庖宜帷⒌庖阴0贰⒓谆獾妊杆俜从ι上嘤Φ,缩写为根据构型的不同,半胱氨酸有汀型和型之分,、是一种氨基酸,它的存在可以保持蛋白质的稳定性,同一条或不同多肽链两个话腚装彼胱氨酸是构成蛋白质的多种氨基酸中具有活性硫匣的氨基酸,它在医药、食品、饲料、化妆品等行业具有广泛的用途