从重组毕赤氏酵母中制备腺苷甲硫氨酸研究.pdf

壅塑塑型壁塑主巡诒に芮刀摘要一—』一用大孔弱酸胜阳离子交换树脂。用此树脂装柱来吸附菔匝椋幌佘占琢虬彼猘狶琒巧锾宓闹匾4恢屑湮质,也是人体内一种重要的生理活性物质,可作为一种重要的药物。本实验室已经构建了强化表达腺苷甲硫氨酸合成酶的重组酵母,使其能强化积累T谝∑糠⒔偷幕∩希疚奶教至酥惺苑⒔吞跫拢髦匾7⒔吞跫对其康挠跋欤⒘四芨卟鶶的中试发酵条件,并且研究摸索出了合适的分离南掠喂ひ辗椒ā通过籐工作体积发酵罐的发酵实验,研究了发酵中、溶解氧、加甘油和甲硫氨酸等条件对细胞生长和鄣挠跋臁=,细胞生长进入稳定期后调节为可以使重组继续积累H芙庋醯褪盨积累高于溶解氧高时邸S呕⒔统始甘油浓度为ィ⒃诜⒔褪绷骷痈视停兄赟的积累。前期加入一定量的甲硫氨酸,发酵中继续流加补充,最后产量达到了疞。对发酵的菌体,采用了先用乙酸乙脂处理,后用酸处理的破胞方法,离心后得到上清。选用不同的树脂做静态吸附及洗脱实验,根据结果吸附及洗脱能力选定了上清的上样量,上清的最适,上样的速度。采用分布洗脱的方法,先用水洗去杂质,然后用疞的硫酸溶液洗脱得到含南赐岩骸T倬胱交换树脂脱盐、浓缩后、用正丁醇和乙酸乙脂的混合液沉淀詈得到了罚浯慷却%,且不易吸潮。
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‰壅堕些鳖塑±鱼丝里塑堕堡!!!籐’譬蚧灿’≮峨第一章前言临床应用植物珏雀髦稚锾宓闹匾4恢屑湮镏剩彩侨颂迥谝恢种匾5纳砘钚晕质,参与了多种生化反应。在生物体代谢网络中,纳锖铣墒蔷璖合成酶..催化甲硫氨酸虯反应完成。慕峁见图幌佘占琢虬彼—,是广泛存在子动物⋯、龆似湓谔迥诘拇蛔饔茫哂猩锘钚缘一拖佘占琢虬彼嵩谔迥主要起转甲基、转硫、;徒到庵饕T诟卧嗤瓿伞S捎赟在体内广泛而且重要的代谢作用,人们积极开拓纳唐坊票福ü俅哺├粗瘟埔钟糁ⅰ⒐亟炎、肝功能紊乱等疾患。梢蕴岣吣阅一羟色胺和沁胚嵋宜岬乃剑愿髦忠钟糁ⅰВ尤其是产后抑郁症哺辛菩А6医掀渌挂钟粢┪镉屑Э臁⒚挥谐神浴⒓乎无不良反应、耐受性好的优点,通常在一周内患者就有明显改善。临床中还发现,氡曜伎挂钟粢缑装舶土帧⒙缺溧骸⒈朽旱攘:嫌靡┍鹊ザ烙药起效快⋯。在临床上芨纳聘喂δ埽诜可以使肝损伤病人恢复一些重要物质的合成,并改善胆汁流,初步的研究结果表明,缘ㄖ倩精肝造成的肝损伤包括肝硬化及其它一些肝功能紊乱都有疗效;尤其对于肝硬化有较好的临床效果,可以显著降低其死亡率哺有抗炎、缓解疼痛和帮助组织再生的功能,因此有助于保持关节的健康。它对骨关节炎的疗效与布洛芬和奈普生相当,但副作用却少得多,而且见效快恰4送猓芯勘砻鳎服图腺苷甲硫氨酸的结构/§
堑丛壁堡主兰垡垒塞————————————中分离铣擅负铣删哂猩锘钚缘腟;随着固定化技术的发展,固定化闹票痈缓琇的面包酵母提取ú馐悄壳按痈髦肿ɡ推诳纤榈降淖罡卟魑V匾5纳镏屑涮逡丫τ玫饺颂濉T诘鹿狄┏Ш鸵獯罄可以增加不育男性的精子活力Ⅲ⒂兄谄吠吹闹瘟啤;经双盲实验证明,它还有助于减轻脑震荡后遗症的治疗¨扪。另外,杂诩∠宋春凸谛牟∫有一定的疗效Ⅲ∞A俅彩匝楸砻鳎琒的耐受性好,副作用远比相同功效的其它药物轻微。正因为此,谂分拮魑R┪铮诿拦魑SQ=∑范还梢曰Ш铣伞⑻逋饷复俸铣苫虼游⑸锓⒔吞崛〉玫健;Хê铣捎于它的产率低,反应底物乙一高半胱氨酸价格昂贵,反应产物又为一腺苷甲硫氨酸的混旋物等明显缺点,而很少被实际应用【薄驯首先用从肝脏细胞中提取的铣擅复呋铣蒘;‘¨:取没蚬こ淌侄危铣擅缚寺〉,ê铣删」芊从Σ锎慷雀撸ǔ杀咎ǜ撸砸般只用于合成同位素标记的”】。而某些微生物可以在细胞内积累过对这些微生物的发酵,尤其是培养基中添加一定量的甲硫氨酸的情况下,可以获得大量的R虼送ü⑸锏姆⒔停俅又刑崛【芐是目前工业生产闹饕M揪丁含量低,分离纯化困难,没法形成可行的生产工艺;通过筛选嘀不同的菌株,分离到一株菌,在培养基小量发酵产疞的进一步优化培养条件,该菌在⒔凸拗信嘌天本实验室已经成功地建立了在的细胞内表达来源于甤腟合成酶虻募际趼废撸ü庠碨合成酶蚍别置与强启动子牡骺障拢ü炕泶颯合成酶,从而使重组菌在培养基中甲硫氨酸存在下,在细胞内合成大量的ā薄径家丫度肷夜昕J冀谏唐访啤八济捞薄本实验室已经成功地建立了能强化表达腺苷甲硫氨酸合成酶的重组菌,从而使其能积累泛使用。后的扛叽飈出量。疞
鳌堡塑丝燮墼主巡里壁塑塑堕一—』一纯化曰竦梦榷ā⒋慷冉细叩腟的硫酸盐。基酸。近年来,随着生命科学的发展,离子交换法分离的对象也由简单的金属离离子交换树脂是一种带有功能基的三元网状结构的高分子聚合物,其结构由生物技术的~个重要的目的是生产生物制品。其中中下游技术即发酵和分离纯化是生产放大