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土壤酶活性测定
几种水解酶:芳基硫酸酯酶(Arylsulphatase(EC )), 葡萄糖苷酶(β-glucosidase(EC ) )和磷酸单酯酶(phosphmonoesterase(EC ))测定:
这三种酶的测定都是依据人工合成底物(p-nitrophenyl sulphate, p-nitrophenyl glucoside and p-nitrophenyl phosphate,respectively)裂解后释放的p-nitrophenol 的量来测定。
Arylsulphatase(EC ):称取1g土(湿重),与4ml 500mM乙酸缓冲液(acetate buffer)()和1ml底物(25mM)混匀。对照为4ml乙酸缓冲液加1ml灭菌蒸馏水。土壤稍作涡旋振荡,置于旋转摇床20℃,200rpm培养2h。然后,往样品中加1ml 无菌蒸馏水,往对照中加1ml底物。再加入1ml 500mM 氯化钙和4ml 500mM 氢氧化钠以终止反应。悬浮液在旋转摇床上20℃,200rpm振荡30min。9464×g离心5min, 然后在400nm波长下测定上清夜中所提取的p-nitrophenol 的颜色深度。如果是在中性条件下测定,则用蒸馏水取代乙酸缓冲液。标准曲线制作:用蒸馏水配制p-nitrophenol溶液,浓度范围0-50ug/ml。
β-glucosidase(EC ):缓冲液换为改进的通用缓冲液(modified universal buffer)();底物浓度25mM,提取液用Tris缓冲液().
phosphmonoesterase(EC ): 缓冲液换为改进的通用缓冲液(modified universal buffer)()(分别测定酸性和碱性磷酸酯酶),底物浓度为15mM。
脲酶Urease (EC ):
称取5g土(湿土),(80mM)和20ml 75mM 硼酸缓冲液()。涡旋振荡,旋转摇床20℃,200rpm振荡反应4h。。4h后,处理中加2。5ml灭菌蒸馏水,对照中加2。5ml脲。然后用30ml酸化的2M氯化钾提取。悬浮液在旋转摇床20℃,200rpm振荡30min。9464×g离心5min,取1ml上清夜与9ml 蒸馏水、5ml水杨酸钠(sodium salicylate)/ 氢氧化钠溶液和2ml dichloroisocyanuric acid(Na+ 盐)混允,20±2℃静置1h, 在690nm波长下测定溶液的颜色强度。对于中性土壤用用蒸馏水取代硼酸缓冲液。标准曲线用氯化铵标准溶液制作,浓度范围0-。
脱氢酶(Dehydrogenase):
INT(2(p-iodophenyl)-3-(p-nitrophenyl)-5-phenyl tetrazolium chloride)还原酶活性(既脱氢酶活性)采用Von Mersi 和Schinner(1991)的方法测定。1g鲜土置于带盖的玻璃瓶中, 1M Tris缓冲液(pH )和2ml INT