DNA提取方法.docx

DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen, Hilden, Germany)试剂盒中文操作说明书
作者：Allanflying (站内联系 TA) 发布：2012-09-11
DNeasy? Blood & Tissue试剂盒提取样本总 DNA
前处理：
注意：
石蜡包埋组织的 DNA 一般小于650bp,还要视样本类型与保存年限而定。
固定剂一般为福尔马林或酒精。不推荐用蛾酸固定的样本。
溶解时间随样本类型和溶解状态而定。
产量视样本类型和保存年限而定。推荐用 50-100ul的AE缓冲液洗脱纯化的 DNA。
开始前要预热孵化器或水浴锅至 37C，用于操作步骤 9)。
石蜡包埋组织的前处理
操作步骤：
将小片石蜡包埋的组织(小于 25mg)放入2ml离心管中(自备)。
加入1200ul的二甲苯，用力涡旋震荡。
最大转速室温(15-25° )离心5分钟。
移液枪吸去上清。小心不要吸去沉淀。
往沉淀中加1200ul的(96-100%)酒精(目的是洗去剩余二甲苯)，轻柔地震荡。
最大转速室温(15-25° )离心5分钟。
移液枪吸去上清。小心不要吸去沉淀。
重复一次步骤 5-7。
37°孵育10-15分钟，孵育过程打开离心管盖，直到酒精蒸发干净。
加入180ul的ATL缓冲液，继续提取组织总 DNA中的步骤2。
福尔马林组织的前处理
操作步骤：
用PBS润洗组织样本(小于 25mg)两次(目的是去除固定剂)。
去PB§继续提取组织总 DNA中的步骤1.
2 .动物组织总DNA的提取 注意：
1） ATL缓冲液和AL缓冲液可能存储后沉淀，如果沉淀，在 56°孵育直至沉淀溶解。
2） 在AW1缓冲液和AW2缓冲液中加入一定量（见瓶身）的（ 96%-100%）酒精，然
后才使用。
3） 打开水浴锅至56C，用于步骤2。
4） 如果是冻存的样本，拿出来室温预热，避免反复冻融。
操作步骤：
1） 取25mg组织，切成小块，放入的离心管中。加入 180ul的Buffer ATL。
2） 加入20ul的蛋白酶K。涡旋震荡（5-10S）。56 C孵育直至组织消化完全，一般为 1-3小时。偶尔间断的拿出震荡。
3） 涡旋震荡15S,加入200ul的Buffer AL,涡旋充分混匀。加入 200ul的（96%-100%） 的酒精。涡旋充分混匀。（注：样多时可将 AL和酒精预混以节省时间）
4） 转移步骤3中的所有混合液至 DNeasy Mini spin离心柱，柱子放在 2ml的收集管 上（已提供），M 6000g （8000rpm）离心1分钟。弃收集管/液。
5） 将离心柱放在一个新的 2ml收集管上（已提供）加 500ul缓冲液AW1 , M 6000g
（8000rpm ）离心1分钟。弃收集管/液。
6） 将离心柱放在一个新的 2ml收集管上（已提供）。加500ul缓冲液AW2, 20000g
（14000rpm ）离心3分钟。弃收集管/液。
7） 将离心柱放在一个新的或 2ml离心管（自备）上，吸20