革兰氏染色和抗酸染色法.ppt

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革兰染色法
革兰氏染色法是1884年由丹麦病
理学家汉斯克里斯蒂安革兰(Hans
Christain Gran)创立的。
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实验目的和要求

注意事项。
。
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、实验原理
二、实验器材
三、操作步骤
四、注意事项
五、革兰染色的临床意义
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一、实验原理
(-)基本步骤:
1、初染:草酸胺结晶紫染色
2、媒染:碘液媒染
3、脱色:乙醇脱色
4、复染:石炭酸复红复染
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(二)原理:
细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它
们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
初染后,所有细菌都被染成初染剂的蓝
紫色。
碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成结
晶紫一碘的复合物,增强染料与细菌的
结合力。
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当用脱色剂处理时,G+菌的细胞壁主要由肽聚
糖形成的网状结构组成,壁厚、类脂质含量低,
用乙醇脱色时细胞壁脱水,使肽聚糖层的网状结
构孔径缩小,透性降低,从而使结晶紫一碘的复
合物不易被洗脱而保留在细胞内,经脱色和复染
后仍保留初染剂的蓝紫色。
G-菌则不同,由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂
质含量高,所以当脱色处理时,类脂质被乙醇溶
解,细胞壁透性增大,使结晶紫一碘的复合物比
较容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞被染
上复染剂的红色。
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细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为G+菌;
细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色
(红色)的细菌为G-菌。
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实验器材
大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,革
兰氏染色液,生理盐水,载玻片,接
种环,显微镜等。
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三、操作步骤
1、涂片:将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别
涂片、干燥、固定。
2、染色:
(1)初染:加草酸铵结晶紫一滴,约一分
钟,水洗
(2)媒染:滴加碘液冲去残水,并覆盖·
分钟,水洗
(3)脱色:将水甩净,并衬以白背景,用
95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止,约20-30秒,立
即用水冲净乙醇
(4)复染:用番红液染1—2分钟,水洗
3、镜检:干燥后,油镜观察。以分散开的细
菌颜色为准,革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性
菌呈红色。