基因工程的主要技术原理
由于提取DNA的目的、种类、所用的生物、组织材料、实验条件等不同,DNA的提纯有很多方法。其中最常用的是碱抽提法。
第一节 DNA的提取与纯化
大肠杆菌基因组DNA
一、质粒DNA的提取
plasmid DNA
The genomic DNA of E. coli: a single circular double-stranded DNA,
with the contour length about 850 times longer than the cell.
Genomic DNA
闭合环状的质粒DNA,在变性后不会分离,复性快;
(1)原理
1 .碱抽提法提取质粒DNA
DNA双链
变性
DNA单链
复性
强碱
中性
染色体线性DNA和或有缺口的质粒DNA变性后双链分离,难以复性而形成缠绕的结构,与蛋白质—SDS复合物结合在一起,在离心的时候沉淀下去。
变性
(2) 所用的试剂作用
①溶菌酶
能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的-1,4糖苷键。
在碱性条件(pH>8)下有活性。
②葡萄糖
增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械力(震荡)的作用而降解。
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