第二章基因工程的酶学基础
Enzymes
一、限制性核酸内切酶
第一节限制性核酸内切酶
是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列(4—8bp),并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。
(Restriction endonuclease)
2. 性质
内切酶。
原核生物。
即在核酸分子链的内部制造切口的酶。
自我保护作用。
3. 功能
细菌的限制和修饰系统(R/M体系)
1. 来源
限制性内切酶将侵入细菌体内的外源DNA切成小片断。
(1)限制(Restriction)
细菌自身的DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保护,不能被自身的限制性内切酶识别切割。
(2)修饰(Modification)
① Dam甲基化酶
GATC 腺嘌呤N6位置引入甲基
② Dcm甲基化酶
TGG序列在第二个C上C5位置上引入甲基
I 型限制性内切酶
目前鉴定出三种不同类型的限制性内切酶。
二、限制性内切酶的类型
II 类限制性内切酶
III类限制性内切酶
首先由M. Meselson和R. Yuan在1968年从大肠杆菌 B株和 K株分离的。
(1)识别位点序列
EcoB: TGA(N)8TGCT
EcoK:AAC(N)6GTGC
1. I型限制性内切酶
如 EcoB和 EcoK。
未甲基化修饰的特异序列。
需ATP、Mg2+和SAM(S-腺苷蛋氨酸)。
(3)作用机理
在距离特异性识别位点约1000—1500 bp处随机切开一条单链。
Recognize site
cut
1-
(2)切割位点
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