非转染人角膜基质细胞系的建立、鉴定及其克隆化的研究.pdf

——牛莹谨以此文献给我尊敬的导师以及我的家人和所有关心帮助我的人
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非转染人角膜基质细胞系的建立、鉴定及其克隆化研究学位论文完成日期指导教师签字答辩委员会成员签字
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翩签施钉阜学位论文作者签名:珥秀:蹒话月签字日期乏多。年占月牛日签字日期:Ⅺ年加译日独创声明学位论文版权使用授权书沙荩怀崴苤被乩贺扌途廾饲奎拦卫窒蚱渌逃沟难换蛑な槭他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明⒀S腥ūA舨⑾蚬矣泄夭棵呕蚧顾徒宦畚牡母从〖痛排蹋市国学术期刊馀贪电子杂志社”用于出版和编入《中国知识资源总库》,本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其确的说明井表示谢意。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,并同意以下事项:论文被查阅和借阅。⒀?梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗泄厥菘饨屑焖鳎梢采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、忙编学位论文。同时授权清华大学“中授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ学位签字日期论文作者签名;
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非转染人角膜基质细胞系的建立、鉴定及其克隆化研究摘要且”渚哂谢疾÷矢摺⒅旅ば郧亢土夙瘟沏悄汛翘氐恪D壳拔ㄒ坏闹瘟瓢旆肿酉赴睦丛次侍飧阒圃糡狧规模化体外重建的瓶颈。,而建立非转染、无致瘤角膜甤是位煌惹蜃钋安康囊徊阃该髂ぃ芪!蘧μ峁┐蟛糠值那力,加上晶体的屈光力,便可使光线准确聚焦在视网膜上瘛H私悄せ酊莏膜构成的卡要部分,占角膜厚度的%。在维持角膜透明及允许光线穿过具有至关重要的怍用。报多原因均可引起⑸斐P圆”洌是进行扦】【::捐献角膜的高度匮乏,致使绝大多数驯膜基质异常患者因无法得到供体角膜而不能复贰=昀矗悄ぷ橹こ痰起使体外重建组织工程人角膜基质狤,—成为可能。也给众角膜基质异常患者带来了重见光删的希望。在—奶逋庵亟ㄖ校罅空肿酉赴睦丛春屠硐朐靥逯Ъ艿幕竦檬羌毙杞饩龅牧礁龉丶侍猓绕涫,赴性的细胞系被认为是解决大量正常肿酉赴丛次侍獾南M5壳拔止,仍束见成功建立非转染、无致滴性细胞系有关报道。为了解决种子细胞来源问题,本文利川胰酶消化联合组织块贴壁法崩动了的原代培养,通过添肌促贴壁、生长和分裂的物质获得可继代培养的,、,经扩增培养后再次进行细胞属性等鉴定,。为了建立非转染细胞系,木文将撕除角膜内皮层和上滩愕玫降腍片进行鹊鞍酌甘识认缓蠼橹槠讲觠一用【喊坏装逯幸患尤牒%瓼腄疐嘌褐妗%嘌箱扁动原代培养。蠼嘌焊晃狧ㄓ门嘌海岛屑钚猿上宋胎牛血清非转骓鞘せ翌死蚕的沤╩、糯定及“觉曦化研吼
显示,班细胞系细胞仍具有特异性标志蛋白~⑾,表明该细细胞单层肏ㄓ门嘌撼晒辛思檀嘌9鄄旖狒邢允荆琀的潜能,本文又对浚细胞系细胞进行δ艿白浴!O赴拥鞍缀湍ぴ耸涞鞍妆泶蚦∥丰动运输的谱能。可见,本文所建立的非转染细胞系不仪具有细胞系进行了克隆化实验鸦竦昧隼部寺∠赴辏诵图ń峁允荆胞生长因子,⒈砥ぁ闑长因子.、硫酸软骨素珻、羧甲基壳多糖,—的/耆嘌骸8观察发现,鼎动培养笞橹橹苋J加邢宋赴ǔ觯憧沙こ煽碚贴壁能力强,在体外呈现稳定的成纤维样细胞形态,且生长分裂旺盛井能稳定持续传代,细胞经冻存复;后依然保持良好的睡状态和增殖能力,现己传至第代。为了鉴定所建立的非转染细胞系的属性和潜能,本文对第代细胞的形态、生长特性、核型以及功能蛋白的表达等进行了鉴定。,其群体倍增时问为孟赴迪赴淙怀鱿謗染色体的非艇倍性,但其特征性染色体数目依然条,并具有典型的人类染色体特征;对细胞系的免疫荧光检测结果型特征可知,本文所建立的非转染细胞系确为细胞系。为了鉴定所建立细胞系胞系细胞仍具有形成细胞以及细胞与细胞外基质问细胞连接的潜能。还保持有对的属性,而贡3钟邢赴拥白院湍ぴ耸涞鞍椎难粜员泶铮哂行惺拐功能的潜力。为竦胷叮用于—逋庵亟ǖ暮诵驼5腍謋细胞,本文又利用克隆他培养技术科已建立非转染细胞系进行了克降化研究。利用有嫩稀释法对有龅タ私迪赴甑娜旧迨瘴跚移溆姓倍体核型。椒其中一个单克隆细胞林俅谓猩ぬ匦缘募ê捅曛镜鞍妆泶飂由检测。箍定与