江南卷柏提取物抗柯萨奇病毒和单纯疱疹病毒研究.pdf

湖北中医学院
博士学位论文
江南卷柏提取物抗柯萨奇病毒和单纯疱疹病毒的研究
姓名:殷丹
申请学位级别:博士
专业:中医基础理论
指导教师:陈科力
20090510
江南卷柏提取物抗柯萨奇病毒和单纯疱疹病毒的研究摘要物江南卷柏的干燥全草,为常用中草药与民族药。具有清热解毒、抗癌、止血之功效,用于癌症、肺炎、急性扁桃体炎、眼结膜炎和乳腺炎等症旺云南彝族主要用于治疗黄疸型肝炎、肺结核咯血、全身浮肿等症。鄂西土家族尚用于癌症、腹泻、淋病、小儿惊风、吐血、便血、崩漏、痔疮出血,外用则治烧烫伤、外伤出血。并且,以本品为原料制得的江南卷柏片对原发性血小板减少性紫癫、过敏性紫癫、继发性紫癫及多种出血症均有良效目前,中外植物化学工作者已从卷柏属植物中分离出黄酮类、生物碱类、酚类、有机酸类、氨基酸及多糖类等多种化学成分¨F溲芯抗ぷ髦要集中在植物的乙酸乙酯及正丁醇萃取部位,并从前者中成功分离了几十个黄酮类化合物,且除芹菜素外大多为双黄酮类。其中,穗花杉双黄酮等人从卷柏中分离得到№’。我们课题组从卷柏属植物分离得到个双黄酮化合物、龌仆@化合物和龌仆\栈衔铮渲个为新化合物,个成分为首次从这些植物中发现,它们都具有一定程度抑制或/和幕钚裕发现穗花衫双黄酮、罗波斯塔黄酮和罗波斯塔黄酮一分为卷柏属植物共同的特征性成分,它们具有不同程度的抗氧化、抗病毒或抗肿瘤活性,是共同的活性指标成分。其中从江南卷柏的活性部位分离鏊ɑ仆@嗷衔铮ㄎ<γ伤ɑ仆狝、鸡毛松双黄酮、罗波斯塔黄酮一江南卷柏蔷戆乜凭戆厥糁唤龊客ǔNW罡撸易钤缂幢闛患酌种双黄酮成得到了患酌,,,【’
,、罗波斯塔黄酮獍厮ɑ仆琕退牖ㄉ妓ɑ仆ⅥF渲校衔颕—J状未咏暇戆刂蟹掷氲玫剑衔颕和Ⅱ毛松双黄酮虰粲诼薏ㄋ顾仆@啵槐槐ǖ婪⑾钟诼阕又参锫藓松科罗汉松属的鸡毛松,这是首次从其它植物研究中还发现,卷柏属植物江南卷柏、细叶卷柏及薄叶卷柏等均具有良好的体外抗柯萨奇病毒效果伸F渲校暇戆氐囊宜嵋阴ヌ崛∥锊唤可直接杀死病毒,还能有效抑制病毒的生物合成侈6宜嵋阴ゲ课坏闹要特征成分之一是黄酮类化合物,故我们从江南卷柏药材中提取出有效部位总黄酮成分,并考察其工艺和质量,从而初步制定江南卷柏总黄酮提取物的制备工艺与质量标准。然后,以此提取物进行了多次体外和体内抗柯萨奇病毒和单纯疱疹病毒难芯浚〉昧丝隙ㄇ铱煽首先,在江南卷柏提取物制备工艺方面,我们通过单因素试验考察其粗提方法,确定为乙醇回流法;再以总黄酮提取量和浸膏得率为考察指标,用正交试验法对乙醇回流提取工艺进行考察,确定其最佳工艺条件为药材读康ヒ掖蓟亓魈崛次,每次∈保唤幼乓运牖ㄉ妓ɑ仆L崛量和浸膏得率为考察指标,用正交试验法对醇提物的石油醚脱脂工艺进行考察,确定其最佳工艺条件为用原药材读康氖兔鸦亓魈崛次,每次∈保煌阎笠缘团ǘ认〈既芤喝芙夤耍儆么罂资髦写炕离,得到最终产品:总黄酮粉末。具体即以总黄酮的含量和回收率为考察指标,通过单因素试验对树脂的型号、药材上样量、洗脱剂浓度和体积、洗脱流速及树脂重复使用次数进行考察,确定其最佳工艺为用孔树脂对其进行吸附纯化,树脂量:药材量为,以ヒ掖既芤在痟的流速进行洗脱,树脂的重复使用次数为巍在江南卷柏提取物质量标准方面,以紫外分光光度法和高效液相色谱法对提取物的总黄酮含量及穗花杉双黄酮含量进行测定,并进行方法学考和卷柏属植物中分离得到。的效果。型大
察,规范以上述制备工艺所制得总黄酮提取物,:坎簧儆甇%。同时,我们还制定了江南卷柏药材的质量标准,确定其名称、来源、性状,鉴别、含量测定、炮制、性味归经、功能与主治、用法与用量及贮藏。在含量测定中,是以穗花杉双黄酮为对照品,采用高效液相色谱法,测定穗花杉双黄酮的含量,并进行了方法学考察。最后暂定本品以干燥品接着,对江南卷柏提取物的体外抗病毒作用进行了研究。我们选择柯萨奇病毒及单纯疱疹病毒萜涓粗浦芷冢杓埔┪抗病毒作用的三种途径共《疚健⒍圆《局苯用鸹睢⒍圆《驹鲋车囊制作用秩龃碜榻惺匝椤O赴拘允匝楸砻鳎暇戆靥崛∥作为药物终浓度进行抗病毒试验。实验结果显示,抗效果方面,其痬罡卟《疽种坡饰其抑制病毒增殖作用的为“痬罡卟《疽种坡饰ィ琓。抗Ч矫妫渲苯用鸹畈《咀饔玫腎/,《驹鲋匙饔玫腎最高病毒抑制率为%,为。实验结果说明江南卷柏提取物不仅细胞毒性较低,且具有较好的直接杀死病毒和抑制病毒生物合成的作用,其最后,我们对江南卷柏提取物在体内抗柯萨奇病毒的疗效进行了重一次性灌胃、给药浓度依次为,,,,/保渌劳雎史直鹞ィ%,%,%,ィ嗜范ń暇戆乇曜继崛∥。则在此范围内确定,,/魑8摺⒅小⒌腿忠┪锱ǘ冉作为试验动物,用原液腹腔注射建立了病毒感染诱发小鼠病毒性心肌炎致计含穗花杉双黄酮不得少于ァ的癵/。故在此范围内确定直接灭活病毒作用的