肺腺癌实验动物造模.ppt

肺腺癌实验动物造模
整理课件
1
目 录
；
；
：
-A-1 细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型；
( ENU)腹腔注射BALB / c 小鼠；
-stop-lox K-ras G12D小鼠鼻腔吸入Ad-Cre重组腺病毒。
整理课件
2
动物的选择：
小鼠的肺癌在组织、形态、分子特点上与人类肺癌比较相近，且小鼠基因与人类基因的同源性在90% 以上，基因容易操纵，所以小鼠肺癌模型在肺癌研究中应用广泛。
但是人类肿瘤在小鼠体内生长很快，提示小鼠和人类对肿瘤的敏感性有显著差异，并且小鼠肺癌具有散发性和异源性的特点。因此，小鼠肺癌模型对原发性肺癌的研究价值不大，而多用于制备移植性肺癌模型，如在免疫缺陷小鼠体内进行同位或异位移植。
整理课件
3

自发肿瘤模型；
化学或病毒诱癌模型；
乙基亚硝脲( ENU，40 mg / kg) ；A / J 小鼠或BABL / c 小鼠
；
；
SP-C /myc / IgEGF 双转基因小鼠（寿命9 个月），细支气管肺泡腺癌；SV40 T 抗原与p53 蛋白和Rb 蛋白结合，建立的转基因小鼠UT7. 1 发展出多灶性细支气管腺癌。
；
整理课件
4
方法一：采用人肺腺癌SPC-A-1 细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型：
： 裸小鼠（ BALB/C-nu/ nu 裸鼠）；4 ～5 周龄，体重(16±2) g ， SPF 级， 雌雄各半。
2. 方法：皮下注射细胞悬液；
剂量：每只2 ×10^6 SPC-A-1 细胞数；
部位：右前肢腋窝皮下；
：
平均成瘤时间为7 d ；
28 d 后，瘤体平均长径为( ±)mm ；平均短径为( ±)mm ；平均瘤体体积为(2 ±1 )mm3 ；平均瘤重为( ±) g 。
整理课件
5
注意事项：
(1)裸鼠年龄的选择。一般随着裸鼠年龄增大，裸鼠体内正常T细胞会增加， 免疫功能相应增强，影响移植成功率，故一般选取4 ～ 5 周龄的裸鼠为佳；
(2) 肿瘤细胞自身的生物学特性。SPC-A-1 肺腺癌细胞株，因其分化程度低、恶性程度高、生长速度快等特点，故相对于一些手术切除的标本，其建模的成功率较高 ；
(3) 细胞状态的选择。一般选取处于对数生长期的细胞，细胞活力强；
(4) 接种部位的选择。一般在腋窝部皮下成功率较高，因为此部位血管丰富易使肿瘤成活，且方便肿瘤测量及观察；
(5) 穿刺进针的角度及深度。 cm 为宜， 进针过深肿瘤较难观察且易与深部肌肉组织粘连，过浅易致悬液漏出，导致肿瘤生长大小不均。
整理课件
6
方法二：化学诱癌模型
：
SPF 级近交系BALB / c 小鼠，鼠龄为4 ～ 5 周。
：妊娠的第17 天；
乙基亚硝脲( ENU)腹腔注射；
剂量为40 mg / kg 体重；
：子代鼠的鼠龄满32 周时收获其全肺标本。
：病理显示这些肿瘤为处于不同发展阶段的腺瘤和腺癌，腺癌的类型有细支气管肺泡癌样腺癌( 雌性: 5 /6，雄性: 4 /6) 和分化不等的腺癌( 雌性: 4 /6，雄性: 5 /6) ，诱癌频率在雌、雄性小鼠均为5 /6，癌变频率在雌性16 /43，雄性12 /31。
整理课件
7
方法二造模特点
( 1 ) 一次性给药，避开了多次给药的复杂过程；
( 2) 动物耐受好，肺内肿瘤的生长基本不影响小鼠的生长，在长达32 周的观察期间死亡小鼠的数量少；
( 3) 所诱发的肺肿瘤自然演进，有利于动态观察；
( 4) 由于肿瘤发生、发展的不同步性，在一给定的时间点可观察到处于各个发展阶段的肿瘤，有利于评估诱癌频率和肺肿瘤的癌变频率。
( 5) BALB / c 是一个中等易感的品系，与上述几种品系的小鼠相比，B6、A / J 和129 等，随着鼠龄的增长可有自发的肺腺瘤或腺癌形成，在A / J 小鼠肺肿瘤的发生频率可达100%。
整理课件
8
方法三：病毒诱癌模型
采