金属鳌离子使用说明.doc

金属鳌合填料镍柱料说明书固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子, 例如锌。铜,镍, 铁等形成复合物。因此, 该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以, 结合的强度是和缓冲液的 PH 和金属离子决定的。金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料, 借助醚长生 7 个原子的空间。全部容量: 24-30um 的含有 zn 的干胶柱料结构: 6% 的高铰链的琼脂糖柱料大小: 45-165um 平均微粒: 90um 直流速度: 25 度/ 倍柱床/5 厘米高度/ 每小时可达 700 厘米最大压强: 变化:长期 3-13 短期 2-14 化学稳定: 通用含水缓冲液 盐酸, NAOH, 20% 乙醇(保存7 天)物理性质:可以忽略在 PH 或者离子变化下的体积变化耐热性能: 121 度下 M 乙酸钠作用半小时金属螯和柱料保存于事先填充于 20% 乙醇。所以要搅拌驱除 20% 乙醇溶液。换成去离子水。比例是 25% 去离子水和 75% 处理胶。处理金属螯和柱料:1 平衡所有用到的材料于室温。 2 搅拌金属螯和柱料 3 倒水进柱子,驱除气体。用无离子水液封几厘米。 4 将金属螯和柱料连续倒进柱子,用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形成。 5 然后立即用无离子水液封,装上柱盖,连接上泵。 6 打开柱子底部的开关,然后调节泵的流速。通常是不超过 a的。7 经过一个稳定的柱床填鸭后, 维持填压速度为3 个柱床。使用 adaptor1 经过上溯填鸭后,关闭柱床下面开关,移开上面的薄膜,小心的加上去离子水进行液封。2 一定角度插入 adaptor ,确保没有气泡。 3 确保所有的连接都没有问题,柱子/泵/ 样品接受器4 倾斜插入活塞确保没有气泡和管道充满液体。利用活泵正反向的流动确保没有气泡。5 固定 adaptor , 打开柱子开关, 开始缓冲液的流动。先以填鸭的速度直到柱床稳定后。固定金属离子:金属螯和柱料通过水来螯和金属的,避免发生沉淀在胶上。 1 确保柱子已经平衡好。如果有必要可以洗 2 个柱床(去离子水) 2 选择金属离子和 - 中弱性酸。例如铁离子 PH 3 左右就好, 避免形成沉淀和共沉。3 加入一倍柱床的金属离子溶液 45 倍柱床的去离子水洗涤 5 至少 2 倍柱床的平衡缓冲液结合: 发生于 - 之间. 最强反映发生于最后初始缓冲液的选择决定于金属离子和样品的结合性质。乙酸钠或者磷酸钠是比较好的缓冲液中不能使用 EDTA 或者柠檬酸盐最通用缓冲液: - 磷酸钠 乙酸钠强烈推荐加入 - NaCl 用于防止离子交换。通常如果不知道一个蛋白的结合能力, 最好的就是使用锌离子和中性的磷酸或者乙酸盐,同时含有 - NaCl 去垢剂不会影响蛋白质的结合能力金属离子的取代意味着蛋白发生了结合。这种现象可以通过颜色来决定洗脱蛋白:(3 种方法)1 降低 PH( 一步或者分步), 大部分蛋白溶解于 PH4-6 最终 3-4 是可容的。可选择柠檬酸盐, 磷酸或者乙酸盐。2 逐步提高咪唑的浓度