家蚕酪氨酸羟化酶表达纯化及结构性质研究.pdf

论文作者签名:躯』三期::所提交的学位论文是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。日
特嗍:在——年一月解密后适用本规定。非涉密论文苏州大学学位论文使用授权声明论文作者签名:么垫期:旌』至寇本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定,即:学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所蚍绞莸缱映霭嫔、中国学术期刊馀贪电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属导师签名:,、
,腔奖彼喟,多巴是机体合成多巴胺、黑色素及肾上腺素等生物活性物质的前体物,是此类儿茶酚胺衍生物合成的限速酶。酶促反应需四氢生物蝶呤为辅酶、为必需激动剂。广泛存在于哺乳动物、人类和昆虫中。研究发现,儿茶酚胺类物质在昆虫表皮鞣化着色、伤口愈合、外骨骼硬化及免疫黑化中有着极其重要的作用,是催化儿茶酚胺类物质合成的关键酶,是昆虫新陈代谢不可缺少的酶类,因此,在昆虫体内具有重要的生理功能。目前,在昆虫中酪氨酸羟化酶的研究已有些报道,尤以黑腹果蝇研究最为深入。家蚕是目前唯一完成基因组测序工作的鳞翅目昆虫,又是重要的经济昆虫。本研究以家蚕为材料,对家蚕酪氨酸羟化酶进行组织表达定位、结构和性质方面的初步研究。实验克隆获得了家蚕酪氨酸羟化酶基因的完整开放阅读框,,,内含有四氢生物喋呤及结合位点;将连接到原核表达载体上并转入中,通过优化诱导表达条件,发现在浓度为嬗盏急泶时原核表达量最高,是以可溶性活性蛋白形式存在,亲和层析分离纯化获得高纯度有活性的重组蛋白,甈允酒浞肿恿吭嘉话攵縋显示在家蚕的的头部、脂肪体、丝腺、性腺均有表达;免疫荧光定位发现诩也螧细胞的细胞质中表达,在表皮组织中主要定位在内表皮和皮下脂肪体上;此外,还建立了高效液相紫外检测法测定家蚕酪氨酸羟化酶活性的方法,该方法快速、稳定、灵敏度较高,可用于昆虫酪氨酸羟化酶活性测定;。,当突变之后酶活下降,且内源荧光光谱发生部分蓝移和荧光强度下降,说明突变造成了结构发生改变,从而影响了酶的活性;说鹘谇虻娜笔В家蚕酪氨酸羟化酶表达纯化及结构性质的研究琓珽
能调节区域的缺失影响了四聚体结构的稳定性。明显的降低了酶活性,且内源荧光光谱显示发生了部分蓝移和荧光强度下降,可综上所述,本研究结果为进一步研究家蚕酪氨酸羟化酶的结构功能和调控机制奠定了基础。关键词:家蚕;酪氨酸羟化酶;表达纯化;组织定位;酶活性;结构性质作者:桂江指导教师:韩宏岩贡成良家蚕酪氨酸羟化酶表达纯化及结构性质的研究中文摘要
,瑂—,琣琱甋瑆瑃琣,.,—,瑃瓵琲:家蚕酪氨酸羟化酶表达纯化及结构性质的研究英文摘要,’,●·‘一
;琣,:瑆。,;.,,—.,.,,—,.瓼,瑃瑃琭;英文摘要家蚕酪氨酸羟化酶表达纯化及结构性质的研究..築籩;
录目言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一第一章综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯野彼狒腔傅母攀觥野彼狒腔傅难芯拷埂人类酪氨酸羟化酶的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一哺乳动物酪氨酸羟化酶的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一昆虫酪氨酸羟化酶的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··野彼狒腔傅幕钚缘鹘诨啤ぁ参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..第二章研究目的与研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.芯磕康暮鸵庖濉芯康闹饕D谌荨际趼废摺第三章实验材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯笛椴牧稀载体与菌种⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯生物材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯工具酶及试剂盒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯其它试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯主要实验试剂与配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯S靡瞧鳌S檬笛榉椒ā感受态细胞的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯