乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及表达.pdf

第34卷第3期 南华大学学报?医学版 JournalofNanhuaUniversity(MedicalEdition) 2006年7月 ?基金项目:湖南省卫生厅资助课题(编号:B2005084). 通讯作者:万艳平,教授,硕士生导师,E-mail:******@. 乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及表达王?静,蒋永林,李金丽,蔡恒玲,万艳平(南华大学病原生物学研究所,湖南衡阳421001) 摘?要:目的?构建含乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)X基因的真核表达载体,为探讨HBVX 基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系提供实验依据。方法?用PCR方法扩增含EcoR?和Hind?酶切位点的X基因序列,(+)载体及X基因PCR产物双酶切,用连接酶将两者连接并转化大肠杆菌DH5?,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定, (+)-HBx。用梭华-Sofast TM基因转染试剂将其质粒转染THP-1巨噬细胞,细胞裂解液经SDS-PAGE 及转硝酸纤维素膜后做Westernblotting,鉴定目的蛋白。结果?(+)-HBx后,,(+),经序列测定其含有完整的X基因片段;(+)-HBx能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白。结论?(+)-HBx,并能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白。关键词:乙肝病毒(HBV);?X基因;?X蛋白;?真核表达中图分类号:???文献标识码:A???文章编号:1672-7444(2006)03-0320-04 ConstructionandExpressionofEukaryoticVectorforHBVX WANGJing,JINGYong-lin,LIJin-li,etal (InstituteofPathogenicBiology,NanhuaUniversity,Hengyang,Hunan421001,China) Abstract:Objective?Thisstudywasdesignedtoconstructandexpresstheeukaryoticexpressionvectorof othechronichepatitisandthehepatocellular.?Methods? XgenewithEcoR?andHind?endoenzymesiteswasobtainedbyusingPCR,(+) ,reconstructedplasmidwastransfectedinto THP--1celllysatebyWestern-blotting.?Results?Thetarget geneXfragmentabout46