生化实验一：总糖和还原糖含量的测定.doc

总糖和还原糖含量的测定实验报告南京大学生命科学学院张茜 111070094 实验目的: 植物体内的还原糖,主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物体内的分布,不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况, 而且也是呼吸作用的基质。还原糖还能形成其他物质如有机酸等。此外, 水果蔬菜中糖量的多少, 也是坚定其品质的重要指标。还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用, 其他碳水化合物, 如淀粉蔗糖等, 经水解也生成还原糖。通过本实验, 掌握还原糖定量测定的基本原理, 练习比色定糖法的基本操作, 热悉分光光度计的使用方法。实验原理: 1. 还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。 2. 美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应:还原糖与氨基酸/ 蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应,生成棕/ 黑色的大分子物质,同时还产生具有不同气味的中间体分子, 包括还原酮、醛和杂环化合物, 为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。 3. 还原糖的测定方法: 3,5- 二硝基水杨酸法在波长 540nm 下, 一定浓度范围内, 还原糖的量与光吸收值呈线性关系, 可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。 4. Lambert-Beer 定律 A=lg(I 0 /I)=lg ( 1/T ) =KCl A :吸光度 I 0 :入射光强度 I :透射光强度 T :透光度(透射比) K :比例常数 l :溶液厚度实验仪器,试剂与材料: 1. 实验仪器: UV2600 紫外可见分光光度计 2. 实验试剂: (1) 标准葡萄糖(2) 3,5- 二硝基水杨酸( DNS 试剂) (3) 6mol/L HCl (张茜配置) (4) 6mol/L NaOH (张茜配置) (5 )碘- 碘化钾溶液 3. 实验材料:市售面粉。实验步骤: 1. 还原糖的提取准确称取 面粉,加蒸馏水约 3ml ,在研钵中磨成匀浆。,转入三角烧瓶中, 用约 30ml 蒸馏水冲洗研钵 2~3 次, 洗出液也转入三角烧瓶中。于 50 ℃恒温水浴中保温 20min ,不时搅拌,使还原糖浸出。将浸出夜(含沉淀)转移到 100ml 离心管中, 于 4000r/min 下离心 5min , 沉淀用 20ml 蒸馏水洗一次, 再离心, 将两次离心的上清液合并,用蒸馏水定容至 100ml ,混匀,作为还原糖待测液。取 1ml 进行还原糖的测定。 2. 总糖的水解准确称取 面粉,加蒸馏水 3ml ,在研钵中磨成匀浆后转入三角烧瓶中,并用 12ml 蒸馏水冲洗研钵 2~3 次,洗出液也转入三角烧瓶中。再向三角烧瓶中加入 6mol/L HCl 10ml ,搅拌均匀后在沸水浴中水解 ,取出 1~2 滴置于白瓷板上,加 1滴I 2 -KI 溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不显蓝色。水解完毕,冷却至室温后用 6mol/L NaOH 溶液中和至 pH 呈中性。然后用蒸馏水定容至 100ml ,过滤, 取滤液 10ml , 用蒸馏水定容至 100ml , 成稀释 1000 倍的总糖水解液。取 总糖水解液