《实验四 柱层析分离》.ppt.ppt

实验四柱层析分离芦丁和槲皮素以及聚酰胺 TLC 鉴定芦丁和槲皮素一、实验目的?掌握用聚酰胺柱层析分离芦丁和槲皮素的方法。二、实验原理 O OHOH OH O OH HO O OHOH O O OH HO GlcRha 1. 槲皮素与芦丁的结构槲皮素芦丁二、实验原理?根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。?一).比较黄酮苷?1. 展开剂的极性较大(水溶性溶剂所占比例>50% )时,如:含水醇或水:甲醇:丁酮:乙酰丙酮=65 :15:15:5; 洗脱先后顺序:?三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元?理论: 用反相色谱理论来解释。二、实验原理?2). 展开剂的极性较小(脂溶性溶剂所占比例>50% )时,如:苯:丁酮:甲醇= 60 : 20:20; 洗脱先后顺序: ?极性小的先洗脱,极性大的后洗脱。?用正相色谱理论来解释。二、实验原理?二).黄酮苷元之间的比较: ?用氢键吸附的原理来解释。二、实验原理?本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统中,洗脱原理与 RP-18 的洗脱原理类似,因此,芦丁先从聚酰胺柱上洗脱出来,槲皮素后从聚酰胺柱上洗脱出来。?(一) 柱层析分离芦丁和槲皮素 1. 装柱聚酰胺 5g,加水 50ml ,搅匀, 倒入层析柱中(打开层析柱活塞,让水滴出,让聚酰胺自由沉降而填实。注意保持液面 1cm 高度。) ?2. 加样芦丁和槲皮素各 , 加甲醇 2ml 溶解,加聚酰胺 g ,在水浴上除尽甲醇,将所拌样品轻轻的置于柱上端。 3. 洗脱加好样品后,先用 50% 的乙醇冲洗, 待两层析带之间的距离约 1cm 后,再用 90% 的乙醇冲洗。?4. 收集用试管收集,每试管接收 30 ml 。?5. 检测分离结果用 TLC 检测。