沙田柚花粉管特异蛋白质的免疫细胞化学研究硕士论文.pdf

沙田柚花粉管特异蛋白质的免疫细胞化学研究学科专业:野生动植物保护与利用◆国家自然科学基金资助项目广西师范大学硕士研究生学位论文—系:生命科学学院年级:级研究方向:野生植物生物学师:秦新民教授研究生:莫花浓完成时阃:
沙田柚花粉管特异蛋白的免疫细胞化学研究摘要本研究应用免疫胶体金标记抗体技术检测了沙用柚⒒ㄆ诘幕ǚ哿:桶谆ㄊ诜酆/ㄖ械幕ǚ酃苁侗鸬鞍准一核酸酶的定位分布;探讨了沙田柚花粉离体萌发的优化条件;分析了花粉管中的鞍缀蛃·一核酸酶的来源及转运过程,为沙罔柚配子体自交不亲和识别蛋白的定位研究提供了一些新的实验证据。为分离、鉴定沙阳柚中的换凼产物打下了基础。高等植物自交不亲和性在遗传上受坏控制,。本实验所用的识别蛋白是提取于配子体自交不亲和树种沙阳柚抑制后的花粉管,。按照张龙翔等的方法制备、纯化花粉管坏鞍滋匾炜固搴蚐固濉@玫臀掳窦罫对自花授粉后/ㄖ魏突ㄒ┙邪瘢捎妹庖呓禾褰鸨昙强固寮际醵陨惩柚花柱中的花粉管和花粉粒中的坏鞍子核酸酶进行定位检测,定位糖蛋白。实验结果显示,沙田柚离体萌发的最佳培养基配方为:%蔗糖,チ蛩镁,龋ハ跛峒兀.%硝酸钙,ヅ鹚幔,。以沙田柚花粉管鞍孜R豢沟拿庖呓鸨杲峁允荆越换ㄖ械幕ǚ酃坏鞍字饕7植加谀谥释⑾赴屎拖赴宋獗谏希诨ǚ哿7矫妫饕<分布在花粉内外壁上,尤其是在花粉粒萌发孔及萌发孔附近。用正常兔血清和嬉豢沟那衅峁室跣裕得魃鲜雒庖呓鸨昙俏?煽康奶匾煨员昙恰对于花粉管叶鞍椎降资窃诨ǚ酃苌す讨行纬傻幕故窃诨ǚ勖确⒐巾从花粉粒获得的这个问题至今未能解决。我们的实验表明开花期花粉粒中有鞍追植迹ǚ酃苤蠸蛋白是在花粉萌发过程中从花粉粒获得的,这些鞍是在花粉粒萌发前停留于萌发孔附近,待花粉萌发后进入花粉管,在花粉管生长过程中参与识别反应。沙嗣柚花粉体外萌发抑制生长试验已经表明,沙田柚识别蛋白高效表达是存授粉后糜ü庀晕⒕倒鄄煜允荆程镨只ǚ酃芡V股び谑诜酆蟮花柱处,自交花柱免疫酶标和金标结果显示,自花授粉后鞍子赡谥网合成,经外排作用,穿过质膜,定位于纤维壁上。我们的实验揭示授粉后花柱中的花粉管的特异蛋白分布和花柱中的特异蛋白分布到它们向外运送到壁的过程是同时进行的,迸一步证实了花柱蛋白换虮泶镂坏慵笆奔溆牖ǚ酃中的虮泶镂坏愫褪奔涫峭背鱿值摹U庥隒等的研究一致。遗传学研究表明,自交不亲和性受特定基因控制,具有某一基因的雌蕊抑制有相同等位基因的花粉管萌发生长。我们的实验证实沙田柚花粉粒、花粉管和花柱绲恼庑┑鞍字试谝糯鲜鞘芡换蚩刂频模蚨贾伦越徊磺缀汀I池柚花柱中的花粉管的亚显微结构观察揭示沙阳柚花粉管是在通道细胞间隙中生长通过,通道细胞分泌端角质层下腔中有溢泌物,通道细胞细胞壁和花粉管雄级野生动植物保护与利用专野生植物生物学方向研究生导师莫花浓秦新【
紧密接触,为识别反应提供条件。所以我们可以这样认为,授粉后眑/花柱通道细胞纤维外壁上鞍谆鄞锏揭欢鲋岛螅耸被ǚ酃苌さ/Γ花粉管壁与通道细胞壁接触,外壁上鞍鬃R浦粱ǚ酃埽侗鸱从Γ率花粉管停止生长。从细胞水平上证实沙田柚自交不亲和识别部位是在花柱通道细胞分泌面外壁与沙用柚花粉管壁的接触处。以—R豢沟拿庖哂啾杲峁允荆琒甊在花粉粒和花粉管中的分布和鞍自诨ǚ哿:突ǚ酃苤械姆窒蚴窒嗨啤4铀窃诨ǚ哿:突ǚ酃苤的分斫剿窍蛲獾脑怂凸趟坪跬鲆徽蕖S谜M醚G搴蚉代替一抗的切片,结果呈阴性,说明此组免疫金标也为可靠的特异性标记。山此知,籖也极有可能参与了沙田柚自交不亲和反应。同时,本实验说明了免疫胶体会标记抗体技术是研究自交不亲和识别蛋白产生时空关系及识别部位的一种可靠方法。关键词:沙田柚花粉管鞍着渥犹遄越徊磺缀兔庖呓禾褰
—时,~魊,.%.%,%琌。%,%琾。甋..瓵,皐甌..瑃~甀’—..猵】.猵,—.%琧,
,.甇甋.,,——甌.’—縠,瑃琫..—,甋.,甌,.瑃..
.瑃’琓瓼一甀籶;::
综述一、免疫胶体金标记技术原理及其在植物研究上的应用、胶体金标记技术原理年和【【谝淮伪ǖ懒私禾褰鸨昙窍赴械缱酉晕镜的研究年首次将胶体金作为一种特殊的标记物标记抗血清,由此丌创了用于电镜研究的免疫金染色法:—=来,胶体会标记技术不仅越来越广泛地应用于透射电镜中研究各种生物大、小分子的定位、定性、形态发生、抗原特性等,而且同样应用扫描电镜和光学鼎微镜⒔禾褰鸬奶匦胶体金是指金的一种存在状态,即金的粒子大小约为的余溶胶,这种状态下的溶胶离子能透过滤纸,但不能透过半透膜,属多相不均匀体系,即为悬胶液,带负电荷。胶金粒同其他胶体一样也具有双层结构,中间为许多金分子构成的胶金核,其外为及部分反离子形成的吸附层。胶金核同吸附层合在一起叫胶会粒。胶体金的颗粒表面带有较多的电荷,表面能够吸附结合多种生物大分子庖咔虻