分光光度法及分光光度计使用方法.docx南方医科大学
生物化学与分子生杨学卖脸教学中心
内容
分光光度法的原理
如何求被测组分的含量
分光光度计的基本结构
分光光度法
•概念：是利用物质所特有的吸收光谱来
鉴别物质或测定其含量的一项技术。
•特点：灵敏度高、精确度高、操作简便 、快速。对于复杂的组分系统，无须分 离即可检测出其中所含的微量组分的特 点。
分光光度法的原理
• Lambert 定律
入射光强度I。
►
溶液浓度
4
c::::二
透过光强度
液层厚度
透光率T = y lg
分光光度法的原理
Beer定律
溶液浓度
入射光强度I。
►
透过光强度
L
液层厚度
--k^c
分光光度法的原理
• Lambert-Beer 定律
如果同时考虑液层厚度和溶液浓度对光吸收的影响，将Lambert和Beer定律 合并，描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系。
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