微生物生理生化实验报告.doc

微生物生理生化实验报告.doc实验十
IMViC与硫化氢试验
指导教师：李海花
周六第三组
学号：060122010041
姓名：宋天佳
专业：2010级水产养殖
学号：030212010025
姓名：皇昊
专业：2010级化学1班
学号：060122010055
姓名：续鹏辉
专业：2010级水产养殖
一、 实验目的
了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。
二、 实验原理
IMViC 是 1一口引味（indol test）、M—甲基红（methyl red test）, V一伏-普（Voges-Prolauer
test）和C —柠檬酸盐（citrate test） 4个实验的缩写。这4个实验主要用来快速鉴别产气 杆菌与大肠杆菌，多用于水的细菌检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水时若超过一 定指标，则表示水质受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水是要将 两者分开。硫化氢（H2S）实验也是检查肠道细菌的生化实验。
（一） U引味试验（indol test）
U引喙试验是用来检测□引味试验的产生，有些细菌分解培养基中的色氨酸生成□引跺（靛基 质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰口引味而呈红色。
色氨酸+H2O色氨酸酶 U引味+NH3 +丙酮酸
A
“引跺+对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰眄I味（红色）
只有部分细菌能产生色氨酸酶，从而具有分解色氨酸产生"引味的能力，因此口引嗥实验可 以作为一个生化检测指标。大肠杆菌产色氨酸酶实验结果为阳性（红色），产气肠杆菌不产 色氨酸酶实验结果为阴性（无色）。
（二） M-甲基红试验（methyl red test）
用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。细菌代谢糖产生酸使培养 基变酸（pH下降），使甲基红指示剂变色：橘黄色（ 红色（）
尽管，所有肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但大肠杆菌和产气肠杆菌有区别： 两者在培养早期产生有机酸，但大肠杆菌在培养后仍能维持酸性pH4,而产气肠杆菌则将有 机酸转化为非酸性产物，使pH上升至6左右。因此，大肠杆菌为阳性（红色），产气肠杆 菌阴性（黄色）。
（三） 伏-普实验（Voges-Prolauertest）
测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物（如丙酮酸）的能力。丙酮酸进行缩合、 脱竣生成乙酰甲基醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋 白豚中的精氨酸的肌基作用，生成红色化合物，及伏-普反应阳性，不产生红色化合物者为 反应阴性。碱性条件、加入少量含弧基的化合物可使反应更明显。
大肠杆菌不产丙酮酸实验结果为阴性（无色），产气肠杆菌产丙酮酸实验结果为阳性（红色）。 葡萄 >丙酮酸-C02缩俞 乙酰乳酸-C02脫酸 乙酰甲基甲醇+0H—举弧基+二乙
酰 >红色化合物
（四） 柠檬酸盐试验（citrate test）
用来检测柠檬酸盐是否被利用，有些细菌以柠檬酸钠为碳源，培养基中的柠檬酸和磷酸 鞍被分解后，产生碱性化合物，使pH升高，当加入1 %漠麝香草酚蓝指示剂时，培养基就 会有绿色转变为深蓝色，漠麝香草酚蓝指示范围：pH<6黄色，pH 6~7绿色，pH >7 蓝色。大肠杆菌不能利用柠檬酸盐实验结果为阴性（绿色）