安捷伦1260高效液相操作规程.pdf

安捷伦1260高效液相操作规程.pdf安捷伦液相 1260 高效液相色谱
操作规程

查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相
和固定相。如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进
行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项：
①　避免使用高粘度的溶剂作为流动相；
②　所选用的流动相一定要与样品相溶；
③　各流动相之间可以很好的相溶；
固定相选择注意事项：
a. 正相色谱
正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官
能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，
分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先
被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正
已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene
Chloride）等。
b. 反向色谱
反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相
对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为
水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性
较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保
留。 常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5
（Phenyl）等。
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①　用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过 µm 过滤器
过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；
②　流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联
等牌子的），并且在使用之前一定要使用 µm 过滤器过滤，再用超
声波清洗仪脱气处理 20-30min；
③　在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，
（一般用异丙醇将管路清洗）

（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应 A
泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D 泵根据需要添
加。
注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。
（二）先打开计算机登陆 windows 操作系统，再将仪器的泵、
色谱柱、检测器打开，待计算机界面显示连接好后，双击桌面“联
机”图标，进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控
制”画面。
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模块右上角状态灯颜色说明：无色，未开电源或者模块准备就绪
黄色，模块未准备就绪
　　　　　 　　　　　　　绿色，正在进样分析　　
红色，模块出错