《动物细胞培养》实验内容.doc

《细胞工程实验技术》
(动物细胞培养部分）
目 　录
实验一　　实验器材的清洗、包装和消毒ﻩ1
实验二 常用的仪器设备介绍ﻩ2
实验三 　常用动物细胞培养用液的配制ﻩ２
实验四　　组织块原代培养、传代培养及生物学检测ﻩ4
实验五　 心肌细胞的原代培养、传代培养及培养细胞的常规检查ﻩ6
实验一　　　实验器材的清洗、包装和消毒
一、实验目的
掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。
掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。
掌握正压滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。
二、实验用品
以组为单位包装物品
量筒（１０0mL、５00mL)
大、小烧杯3个 　 　 　
1000mＬ容量瓶×1
移液管１mL×3(灭菌）
(100ｍL、25０mL、50０mL)盐水瓶、(5００ｍL)广口瓶×各4(灭菌)
眼科剪刀、眼科镊子各２把(灭菌)
细胞培养瓶×3(灭菌）
其它：饭盒、青霉素瓶、牛皮纸、离心管、滴管、注射器、磁棒、绳、标签纸等杂干。
三、实验内容
清洗
要领：浸泡、刷洗、酸泡。
步骤:洗衣粉浸泡12h→刷洗→流水震荡冲洗1５～20遍→漓水→蒸馏水洗荡2次→37℃烘干→待包装。
注意事项：
使用后的器材要立即投入水中。
器皿内要充满液体,不得有气泡。
器材要用流水震荡干净。
包装
大的器材如:量筒、广口瓶、培养皿、吸管等要包装。
小的器材如:注射器、剪刀、镊子放入饭盒。
注意事项:
包装时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材使用端。
封闭器材使用端,标记器材手持端。
小包装
玻璃管道口加棉花。
湿热消毒:高压灭菌锅消毒
四、作业
清洗的要求为何较高?你认为该如何保证器皿中无杂质?
器材包装有何要求?
实验二　 常用的仪器设备介绍
一、实验目的
了解动物细胞培养中常用仪器设备的使用方法、注意事项和保养方法
二、实验用品
超净工作台
自动双重纯水蒸馏器
高压蒸气灭菌器
过滤器
电热恒温干燥箱
二氧化碳培养箱
冰箱
倒置显微镜
三、实验内容
了解超净工作台的工作原理
自动双重纯水蒸馏器结构、使用注意事项。
高压蒸气灭菌器的工作原理
正压过滤器的使用方法
二氧化碳培养箱的使用方法
四、作业
１、叙述超净工作台的工作原理
2、正压过滤器为何会除菌
实验三　 常用动物细胞培养用液的配制
一、实验目的
掌握常用动物细胞培养用液的组成及配制方法。
二、实验用品与仪器
量筒、烧杯、广口瓶、天平、各种无机盐、
三、实验内容
(一）平衡盐溶液的配制
1、平衡盐溶液的配方如下：
NaCl
KＣl
CaCｌ2
ＭｇSO
Nａ2ＨPO４·2Ｈ
KＨ２PＯ
NaＨCＯ
葡萄糖
苯酚红
４·7H2O
2O
４
3
Haｎｋs
8．０0




0．06

１．0０
0．０2
D-Haｎks
8．00


0．０6


I组配Ｈａnks（10０0mL）,V组配D-Ha