水貂细小病毒的分离鉴定与卵黄抗体的制备.pdf

摘要摘要水貂传染性肠炎又名水貂病毒性肠炎,是由水貂肠炎病毒(MEV)引起的一种急性、高度接触性、致死性传染病。该病广泛存在于世界各国,是威胁水貂养殖的最大疾病之一,给养貂业带来巨大的经济损失。在我国水貂传染性肠炎的预防主要是定期免疫接种,但近年来应用疫苗免疫失败的现象时有发生,有时呈地方性流行。发病水貂除采取对症治疗外,没有有效的治疗药物,为此,我们开展水貂水貂的流行病学研究工作,并在此基础上,开展抗水貂病毒性肠炎抗体的研究工作。本研究应用猫肾FSl细胞从疑似MEV感染的水貂病料中分离病毒,通过血凝试验、PCR等方法对分离得到的病毒进行鉴定。同时对分离得到的病毒和大连送检的水貂病料的VP2基因进行了测序和遗传进化分析。在此基础上,以分离得到的病毒为抗原,选择种属关系远的蛋鸡作为免疫对象,制备卵黄抗体。利用氯仿和硫酸铵结合的方法提纯卵黄抗体,应用血凝抑制试验评定抗体的效价。结果利用F81细胞成功分离出一株病毒,命名为MEV-,鉴定结果表明这是一株水貂细小病毒强毒株,具有良好的免疫原性。序列测定结果表明,MEV- 100%,VP2基因全长1755个核苷酸,编码584个氨基酸,与MEV标准毒株MEV- type2 VP2基因大小相同,已上传Genebank,序列登录号为GU272028、GU272029。基于细小病毒的系统发生表明,MEV-、Surfing亲缘关系近,为目前国内流行株。用MEV-,得到含有抗MEV抗体的鸡蛋,用氯仿和硫酸铵结合的方法提取卵黄抗体,血凝抑制试验表明抗体水平随免疫次数的增加呈上升趋势,三免后的血凝抑制价为l:1024。对感染 MEV的水貂进行治疗,治愈率100%,研究结果显示,MEV卵黄抗体可进一步开发用于水貂细小病毒肠炎的治疗。关键词水貂细小病毒;分离鉴定;VP2基因;卵黄抗体 Abstract Abstract Mink infectiousenteritisthatis alsoknown asmillI【viralenteritis,caused anacute,high contact and fataldiseaseby Mink enteritisvirus(MEV).T11iS diseaseiswidespread inthe worldand one ofthegreatest diseases inmink although minkpopulations have beenwidely ineimmunity,mink thetreatment mainly issymptomatic treatment,there is no isnecessary prehensively study thebiological characteristicsandunderstand theinfectionsituationof MEV inChina,and conduct samples werecollectedfrom ording tothe felinekidney cell lineFS was used tomultiplicate the andothermethods wereused toidentify theMEV Threepairs ofprimers weredesignedand used toamplify VP2 gene ofisolated virusand mink samples fromDalian,thehomology ofnucleotide were thisbasislaying hens wereimmunizedby M匝_V samples toprepare theegg yolk antibodies09V).Chloroform methodand ammonium sulphate method Was tested、析m avirulentstrainwas essfully isolatedand named N匝V|.ZYL—1withgood nucleotidehomology w洫the is