PEG诱导细胞融合.docx

细胞生物学实验报告 黄振（041141016）

实验十一 PEG诱导细胞融合
一、实验目的
1．了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术。
2．学会鉴别融合细胞。
二、实验原理
细胞融合又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的现象。细胞融合技术是细胞工程骨干技术，除了用于一些基础性研究外，在植物方面主要用于合成新种；动物方面主要用于生产单克隆抗体。
细胞融合的诱导因素主要有以下三种：
1、生物融合因子：如病毒。
2、物理因素：如电融合仪,主要用于植物细胞。
3、化学因素：如聚乙二醇（PEG），分子量200－6000都可用，以1000较好。聚乙二醇最早用于诱导植物原生质体的融合，现已普遍用于多种细胞。其优点是:材料易得、操作方法简单、效果稳定。
病毒介导的细胞融合常用灭活的仙台病毒，主要用于动物细胞融合。其优点是融合率高，对各种动物细胞都适宜；缺点是不稳定，在保存过程中融合活性降低，并且制备过程繁琐。
细胞融合，即在自然条件下或利用人工法 (生物的、物理的、化学的)，使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。 人工诱导细胞融合始于20世纪50年代，并迅速成为一门新兴技术。由于不仅同种细胞可以融合，种间远缘细胞也能融合，甚至于动植细胞也能合二为一，因此细胞融合技术目前较广泛应用于细胞生物学、遗传学和医学研究等各个领域，并且取得显著的成绩。
聚乙二醇(PEG)结构为：HOH2C(CH20CH2)nCH2OH，相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂 类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合：细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞核总数与该视 野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比表示。该方法的优点是：用法简单，容易获得融合体，融合效果好。
三、实验材料及用品
实验材料：鸡红细胞、鸡白细胞
实验器材：普通离心机，水浴锅：50ºC，37ºC，细胞计数板
四、实验步骤
配50％PEG：称取10gPEG，加入带盖离心管中；将带盖离心管放入电炉上的沸水中，加热使PEG熔化；待冷却至50ºC时，加入等体积预热至50ºC的HanKs液或不加血清的培养液混匀，保存于37ºC水浴中。
准备鸡血：加2ml肝素抗凝鸡血于10ml带盖离心管中，800rpm离心5min，去血浆；再加5ml Hanks液洗红细胞一次，800rpm离心，去上清；配制成2%鸡血。
分离鸡白细胞：1ml淋巴细胞分离液+1ml鸡血，2000rpm离心20分钟，吸出白细胞放入另一个离心管中加入5ml Hanks液1000rpm离心5min,弃上清。
混合细胞：，用手轻弹离心管底部，使沉淀松散。
PEG介导融合：吸取1ml 50％PEG，在37ºC水浴中1分钟内加入细胞沉淀中，边加边振摇离心管，使PEG与细胞混匀；
终止PEG作用：向试管中加入8－10ml Hanks液轻轻吹打混匀，在37ºC水浴中静置5min（稀释PEG终止其作用，并降低介质密度，便于离心）；
细胞生物学实验报告 黄振（041141016）