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实验九 甲醛滴定法测定氨基酸
一、目的 掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理 和操作要点。
二、原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下 平衡：
H3N+— R— COO— H2N — R— COO — +H+
-NH3是弱酸，，完全解离时pH为11〜12或 更高，若用碱滴定-NH3所释放的H+来测量 氨基酸， 一般指示剂变色域小于 10，很难准 确指示终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结 合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移， 促使-NH 3释放H +，使溶液的酸度增加，滴 定终点移至酚酞的变色域内 ( 左右 )。 因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠 溶液滴定。
R-CH(COO —)-NH 3 R-CH(COO
—)-NH 2+H + NaOH 中和
R-CH(COO —)-NH 2 HCHO R-CH(COO
)-NHCH 2OH HCHO R-CH(COO )-N(CH 2OH)2 如样品为一种已知的氨基酸， 从甲醛滴 定的结果可算出氨基氮的含量 ( 脯氨酸与甲 醛作用生成不稳定的化合物，使滴定 mL 数 偏低。酪氨酸的滴定 mL 数偏高)。如样品是 多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴 定结果不能作为氨基酸的定量依据。 但此法 简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。 随水解程度的增加滴定值也增加， 滴定值不 再增加时，表示水解作用已完全。
三、器材药
25 mL 锥形瓶；3 mL 微量滴定管； 吸管； mol／ L 标准甘氨酸溶液 300 mL 准确称取 750 mg 甘氨酸，溶解后定容至 100 mL；
m01／L 标准氢氧化钠溶液 500 mL ； (标准氢氧化钠溶液应在使用前标定， 并在 密闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定 管中的剩余氢氧化钠。 )
酚酞指示剂 20 mL ％酚酞的 50％乙 醇溶液
中性甲醛溶液 400mL 在50 mL 36〜
37%分析纯甲醛溶液中加入 1 mL %酚酞 乙醇水溶液， mol / L的氢氧化钠溶液 滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂 在临用前配制。如已放置一段时间，则使用 前需重新中和。
四、操作
mL的锥形瓶，编号。向 第1、2号瓶内各加入 mo1 / L的标 准甘氨酸溶液和5 mL水，混匀。向3号瓶 内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5 滴酚酞指示剂，混匀后各加2 mL甲醛溶液， 再混匀， mo1/ L标准氢氧化钠