荧光定量pcr结果分析.doc

荧光定量pcr结果分析.doc如果有标准曲线,按照标准曲线计算。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：
对照组基因A的CT值为20,内参（比如pactin）CT值15。实验组基因ACT值18,内 基CT值14。
首先算加样量：delta CT=15-14=1o 2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的 2倍。
基因A: delta CT=20-18=2o 2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4 倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。
几点注意：
1o必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。
4o最好不用Syber Green
由Ct值用2人-△△Ct法计算计算表达量差异的原理，可以看下面的图片:
3. HA。法相对定量

理想的PC皈应中，PCR产物的量随着
循环数増加呈指数扩増:
其中
n： PCR循环的次数
Xn：第n次循环后的产物量
Xo：起始模板量
j
因此有 血二寸
Ml
从SYBRG劇I标籍理硕,竽CR『鞠异时,就騁正 好PCR产躺鑫
駝-佩光騁離(threshold), 1WPCR产物幟为T° 皱光信号翊號虢餉般历瞬环鹅为C®,貼
熾聊訓起離板訓鏗有
aCM aCM
STBfffitre,需翱入龄駆（GAPDH, actin, 憐刪等）iM 删I酬。,晰
n' y(CtB-CtHS) n-ACtB
% _ \[ a-A(5B-(-A(H) _ a-(AQB-ACM) _ a-MCJ
/ " 2■(朝七朋)-2-⑹~ _ _
g-ACM _ pClA-CtHA) 2'AC/B _
附件的Excel文件是计算用的，感兴趣也可以看看山a值是如何一步一步算出2A-AAQ 的。