免疫磁珠.ppt

?前言?免疫磁珠分离技术介绍?免疫磁分离技术的应用一、前言?免疫磁珠分离技术(ic beads sep — aration techniques , IMB) 是将免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性相结合的一种新的免疫学技术; 是一种特异性强、灵质纯化敏度高的免疫学检测方法和抗原纯化手段。是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。?目前该项技术在细胞分离、蛋白、免疫学及微生物学检测等方面均取得了较大的进展,是目前最有推广价值的技术之一。二、免疫磁珠分离技术免疫磁珠分离技术 1 1 、免疫磁珠分离技术原理、免疫磁珠分离技术原理利用人工合成的内含铁成分,可被磁铁磁力利用人工合成的内含铁成分,可被磁铁磁力所吸引,外有功能基团,可结合活性蛋白所吸引,外有功能基团,可结合活性蛋白质质( (抗体抗体) )的磁珠,作为抗体的载体。当磁珠的磁珠,作为抗体的载体。当磁珠上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物质结合后,则形成抗原质结合后,则形成抗原- -抗体抗体- -磁珠免疫复合磁珠免疫复合物,这种复合物具有较高的磁响应性,在物,这种复合物具有较高的磁响应性,在磁铁磁力的作用下定向移动,使复合物与磁铁磁力的作用下定向移动,使复合物与其他物质分离,而达到分离、浓缩、纯化其他物质分离,而达到分离、浓缩、纯化微生物或特异性抗原物质的目的。微生物或特异性抗原物质的目的。 2、免疫磁珠法分类免疫磁珠法分类⑴⑴、阳性分离法、阳性分离法磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞⑵⑵、阴性分离法、阴性分离法磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞一般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用的更多。 3 3、磁性微珠、磁性微珠(ic beads): (ic beads): ??磁性微珠是以金属离子为核心, 磁性微珠是以金属离子为核心, 外层均匀包裹高分子聚合体的外层均匀包裹高分子聚合体的固相颗粒。固相颗粒。??磁性微珠上既可标记针对某种磁性微珠上既可标记针对某种细胞表面抗原的特异性抗体细胞表面抗原的特异性抗体(直接法) (直接法) ; ; 也可标记羊抗鼠也可标记羊抗鼠 IgG IgG 抗体抗体( (间接法),使分离细间接法),使分离细胞的范围大大扩大胞的范围大大扩大 4 4 、免疫磁性微球的制备、免疫磁性微球的制备磁性微载体的制备: ?包埋法:将磁性粒子分散于高分子溶液中,通过雾化、絮凝、沉积、蒸发等手段得到磁性高分子微球。?单体聚合法:在磁性粒子和单体存在下,加入引发剂、稳定剂等聚合而成的核/壳式磁性高分子微球。基本技术路线:制成磁性材料的微球,再在微球表面引入活性基团,通过载体表面偶联反应可将抗体结合到载体上,形成免疫磁性微球。优质微载体的性能: ?合适且均一的磁响应强度, ?较小且均一的粒径, ?稳定均一、特异吸附的表面性能。抗体与磁性载体的结合:磁性微载体表面的高分子层活化后悬于抗体溶液中, 在室温或低温(冰水浴)下摇动一段时间即可将抗体连接到微球表面上,得到免疫磁性微球。 5、该技术的主要优点该技术的主要优点⑴、细小而均一的微球为配基与受体的反应提供了较大的接触面积⑵、磁珠的磁性使其可以用磁力收集器方便快速地获得分离,且对被分离物无损伤⑶、检测复杂的生物样本和食品样本等时受到颗粒性杂质等的影响较小⑷、作为一种流动性的固相支持物,其洗涤和反应都进行得更加充分