生物样品的处理方法PPT教案.pptx

会计学
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生物样品的处理方法
第五章 药物定量分析与分析方法验证
第一节 定量分析样品的前处理方法
第二节 定量分析方法的特点
第三节 药品分析方法的验证
第四节 生物样品分析方法的基本要求
第五章 药物定量分析与分析方法验证
生物样品分析的特点
1．干扰物质多——生物样品中含有大量的内源性物，如质蛋白质、脂肪等，以及代谢物、结合物等干扰分析
——样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析
2．样品量少、不能重复取样——生物样品多数在特定条件下采集，无法再次取样
3．被测成分浓度低——对分析方法的灵敏度及专属性要求较高
第五章 药物定量分析与分析方法验证
1. 检测方法的高灵敏度—最低检测量10-9~10-7g或10-15~10-12g
2. 分离方法的高选择性、高专属性
为满足各项要求，最常用的分析方法有
1）色谱法——GC、HPLC、HPCE（high-performance capillary electrophoresis）
2）免疫分析法——RIA、EIA
3）联用技术——GC-MS、LC-MS
体内分析方法要求
（1）去除蛋白质(血样)
①加与水混溶的有机溶剂—蛋白质分子内和分子间氢键发生改变. (乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃)
②加中性盐—蛋白质脱水. (饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等)
③加强酸—与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀( 10%三氯醋酸、6%高氯酸、5%偏磷酸等)
④加含锌盐及铜盐的沉淀剂—与蛋白质阴离
子形成不溶性盐沉淀. (CuSO4-Na2WO4、ZnSO4-NaOH)
⑤酶解法—.
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生物样品的处理方法
（2）缀合物的水解(尿样)
含羟基、羧基、氨基和巯基药物
+ 葡萄糖醛酸→葡萄糖醛酸苷缀合物
含酚羟基、芳胺和醇类药物
+ 硫酸→ 硫酸酯缀合物
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生物样品的处理方法
常用方法:
酸水解:盐酸
酶水解: 葡萄糖醛酸苷酶
硫酸酯酶
葡萄糖醛酸苷酶-硫酸酯酶
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生物样品的处理方法
（3）分离纯化与富集
①液-液萃取法
水相pH值是萃取成功的关键
水相最佳pH值
碱性药物：高于pKa值12个pH单位
酸性药物：低于pKa值12个pH单位
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生物样品的处理方法
但生物样品宜在碱性或近中性提取
——生物基质中内源性物质多为酸性，
在碱性下不易萃取

空白血清在pH2、pH7和pH13缓冲液中乙
醚提取，提取液用RP-HPLC(UV)测定，碱
性(pH13)下提取液的杂质峰最少
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生物样品的处理方法
空白血清乙醚提取物的HPLC色谱图
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生物样品的处理方法