岛津LC-20AT型高效液相色谱仪操作规程.doc

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岛津LC-20AT 型高效液相色谱仪操作规程

一．系统配置
系统组成：本系统由 DGU-20A3 脱气机、2 个LC-20AT 溶剂输送泵（分为A，B 泵）、7725i 手动进样器、色谱柱（2个C18柱，3个手性柱）、SPD-20A紫外-可见检测器、LCSolution（Version）中文工作站等组成。
二． 准备工作
1．流动相准备：使用前按待检测样品的检验方法准备所需的流动相（水使用蒸馏水，其他有机溶剂要求色谱纯，无机盐缓冲液浓度一般低于20mmol/L）用合适的滤膜过滤（有机相和水相分别选用各自的专用滤膜，水相使用前必须过滤，有机相用肉眼观察有颗粒时必须过滤）。
2．色谱柱准备：根据待检测样品的需要选用合适色谱柱，柱进出口方向应与流动相流向一致（检查柱上“FLOW”流向）。
3．样品溶液配置：配置样品和标准溶液，用合适的样品过滤器过滤后待用。如检测中发现检测峰拖尾严重，可稀释后使用。严禁使用未经处理的浑浊溶液进样。
4．检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
三． 开机、参数设定及平衡系统
1．开机：接通电源，依次开启B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。
2．排气泡或更换流动相的操作方法
1） 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
2） 逆时针转动A/B泵的排液阀180o；
3） 按A/B泵的【purge】键，pump指示灯亮，泵大约以的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；
4） 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
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5） 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
6） 如按以上方法不能排尽气泡，从色谱柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中设流速为5 ml/min冲洗3分钟，停泵后重新接上色谱柱并将流速重新设定为规定值。
3．参数设定
1）波长设定：一般设为254nm。
2）流动相设定：流速开始不宜太高应为正常分析流速的50％～80％ 冲洗一段时间，等待柱压平稳后可调节到正常流速（调节流速时应该每次增减，不宜调节过快，柱在线时流速一般不超过1ml/min）。流动相比例设为初始比例冲洗柱子，等待基线平衡。
4．平衡系统和色谱柱
1）在工作站操作软件上设定各项方法参数，系统至少需要 平衡 ，色谱柱需冲洗至基线平稳。
2）等度洗脱方式
用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。
检查各管路连接处是否漏夜，如漏夜应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可
判断为柱前管路仍有气泡，进行气泡排除操作
观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<，可认为系统已经达到平衡状态，可以进样。
3）梯度洗脱方式
以检查方法规定的梯度初始条件平衡系统。
在进样前运行1~2次空白梯度。
梯度洗脱后至少需要10倍柱体积的初始比例流动相冲洗柱子至平衡才可再次进样。
4）如果使用前色谱柱中保存的流动相为纯甲醇或纯乙睛，而新流动相中含有缓冲盐时，应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。
5）如系统为正相或反相交换使用，应