实验九碘淀粉比色法测定血清淀粉酶副本
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原理
血清(或血浆)中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1,4糖苷键水解,产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1,6糖苷键支链的糊精。在底物过量的条件下,反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物,其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较,从而推算出淀粉酶的活力单位。
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试剂
操作步骤
计算
参考值
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试 剂
1、:4℃冰箱保存6个月。
2、:4℃避光保存6个月。
: 将碘贮备液:蒸馏水=1︰9稀释,现用现配4℃避光保存。
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操作步骤
混匀,660nm波长,1cm光径,蒸馏水调零,测各管吸光度。
*注:不同样本批量测试前需要做预实验,确定最佳取样浓度,将 (空白OD-测定OD)~
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1、单位定义: 100ml血清(浆)中的AMS,在37℃与底物作用15分钟,水解5mg淀粉为1个单位。
2、公式:
计 算
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样本最佳取样浓度摸索
根据不同动物血清及组织之间的差异,最好是在批量实验之前做个预试以确定最佳取样浓度。
例1:取大鼠血清用生理盐水稀释成不同浓度(2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍),
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临床意义
淀粉酶可通过肾小球滤过。流行性胰腺炎,特别是急性胰腺炎时,血和尿中的AMY显著增高。急性胰腺炎发病后8~12h血清AMY开始升高,12~24h达高峰,2~5d下降至正常。如超过500U有意义,达350U时应怀疑有此病。
尿中AMY约于发病后
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