泥鳅实验方案.doc

壬基酚对泥鳅的急性毒性效应实验方案
一．实验目的
，首先统计出其半数致死浓度和安全浓度。
,观察壬基酚对泥鳅腮组织的影响。
二．实验原因
壬基酚(Nonylphenol)是烷基酚聚氧乙烯醚(APE)的降解产物,由于APE的广泛应用而使壬基酚普遍存在于水生生态环境中,壬基酚因其毒性强、不易降解等特点已引起了人们的高度重视
每间隔2h观察、记录试验鱼的自然状况、死亡尾数、体色、呼吸状况及活动状况
毒症状主要表现为焦躁不安、上下窜动、呼吸减弱、鱼体弯曲、翻肚且倒挂于水中的神经中毒现象；检查可见，鳃丝淤血、鳍部充血、眼球突出、嘴大张。
并成一定的剂量—效应关系
由于NPE在纺织业中都被广泛应用于印染、清洗的工序。而在纺织业之外，NPE也可以用做表面活性剂、清洁剂。具有内分泌干扰效应，可促进乳腺癌细胞增殖，属于内分泌干扰物，致癌物。同时，NPE一旦进入到环境中，就会迅速分解成毒性更强的环境激素——NP，也就是壬基酚。NPE是全世界公认的环境激素。研究表明，即便这种物质排放的浓度很低，也极具危害性。NP具有持久性以及生物蓄积性[3]。也就是说，它一旦被排入的环境中，它会在环境中存在很长时间，而且它可以进入食物链，并且通过食物链逐级放大。同时，它还具有模拟雌激素的作用，因此它一旦进入生物体内之后，就会影响生物体正常的生殖和发育，可以导致人类男性精子数量的减少[4]。
三．材料与方法
1、 实验材料
实验用泥鳅，购于延安市东盛农贸市场，要求大小相似、健康、体型相当、无损伤、行为活泼，体色光亮，反应灵敏，无畸形，食欲好，逆水性强。平均体重为：12± g 平均体长13±3 cm 将泥鳅暂养于已充分曝气3天的自来水中，每天投喂饲料少许，驯养一周后，但在试验前一天和试验期间不予喂食。随机挑选个体差异不大，健康活泼的泥鳅进行试验[8]。
2、试验药物
壬基酚
四、实验步骤
1、 急性毒性试验
在进行正式实验之前先进行2次预实验。查找资料，将NP分别设置5个浓度范围50μg/L，200μg/L，500μg/L，1000μg/L，1500μg/L、2000μg/L，进行预实验，设置空白对照，处理组每组放置5条泥鳅，24h后分别统计泥鳅死亡数。
根据预实验所确定的最小全致死浓度和最大全不致死浓度范围内, 按等对数间距, 将NP分别设置5个浓度处理，进行急性毒性试验, 设置空白对照组 , 每个处理组设2个平行组, 每组放置10条。实验开始后, 连续8 h 观察泥鳅的活动、中毒情况及体色变化, 每24 h统计1次泥鳅的死亡数, 每24 h更换1次受试药液, 以保证药液溶氧量、pH、水温及其他理化指标的稳定, 并及时捞出死亡泥鳅，实验进行96h停止。
2、 鳃组织切片的制作
取NP 中毒死亡和正常泥鳅鳃,置于Bou in固定液中固定3 h。经洗涤、脱水、透明后, 用石蜡包埋, 石蜡切片机切成8 Lm 厚薄片, 并贴片。用苏木素- 伊红染色法(Hematoxylin and EosinS ta in, H1E)进行