AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程.doc

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文件名称
AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程
使用维护标准操作规程
颁发部门
制订人：
复核人：
批准人：
质保部
制订日期：
复核日期：
批准日期：
执行日期
版本

编号
SOP04006
制作份数
_____份
发送部门
修订记录
修订人
修订原因
修订内容
版本
修订日期
目的：
确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、标准化。
范围：
适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。
定义：
无
职责：
荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。
质保部对本规定的有效执行承当监视检查责任。
内容：
室内温度控制在15～30℃，相对湿度45～75%。
仪器操作
依次翻开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。
接着翻开AB7500仪器电源开关，预热10分钟。
点击7500 Software ，翻开软件。
按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8联PCR反响管或者96孔PCR反响板放入检测孔位，记下放置位置。检测8联PCR反响管用**反响孔模块，检测96孔PCR反响板用**反响孔模块。〔检测8联PCR反响管需放入盖紧管盖的空8联PCR反响管配平，检测96孔PCR反响板无需配平〕
再次按压托盘使其滑入仪器。
新建扩增参数模板：例如新建一个UG-63-62的模板，扩增参数是95°，10′；〔95°，10″；63°，45″〕×5 cycle
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s；〔95°，10″；62°，35″〕×40 cycles，在62°时收集荧光信号〔HEX、FAM信号〕，20μl反响体系。
在Setup-Plate Setup-Define Targets and Samples中，将Target Name下的Target1改成FAM；点击Add New Target，将新增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。
-Run Method-Graphical View中的Reaction Volume Per Well后面输入20〔20μl反响体系〕。选中第一个Holding Stage，点击Delete Selected删除；在Cycling Stage中的Number of Cycles后输入5，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度63度，输入时间45秒，将63度下面收集荧光图标点掉；点击Add Stage下拉菜单项选择择Cycling，在Cycling Stage中的Number of Cycles后输入40，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度62度，输入时间35秒，在62度下面点击图标收集荧光。
点击Save下拉菜单下的Save As Tamplate，文件名输入UG-63-62，保存在默认ab7500-config-tamplates文件夹内，关闭设置界面。
已有扩增参数模板：在软件Home界面中点击Template，选择需要的模板，点击翻开。例如：UG-63-62，其扩增参数就是95°，10′；〔95°，10″；63°，45″〕×5 cycles；〔95°，10″；62°，35″〕×40 cycles，在62°时收集荧光信号〔HEX、FAM信号〕，Reaction Volume Per Well:20μl〔20μl反响体系〕。
在Setup-Plate Setup-Assign Targets and Samples中选择8联管摆放的位置，全部勾选Sample 1；UGT1A1*6勾选HEX，UGT1A1*28勾选FAM。
在Run-Amplification Plot中点击START RUN，命名为20210101-1〔当日日期+当日上机次数，例:2021年1月1日第1次上机编号为20210101-1〕，保存在默认文件夹中，开场运行。
结果分析
PCR反响完毕后自动保存结果，对扩增曲线进展分析。
也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以〔用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在3～15