红细胞凝集试验HA与红细胞凝集抑制试验HI.doc

红细胞凝集试验HA与红细胞凝集抑制试验HI
红细胞凝集试验HA与红细胞凝集抑制试验HI
红细胞凝集试验HA与红细胞凝集抑制试验HI
红细胞凝集试验（HA)与红细胞凝集抑制试验（HＩ）
用疫苗按一定免疫程序进行免疫接种是控制鸡病流行的主要途径之一,这种观点已被广大养殖户接受并引起足够重视。但鸡群免疫抗体的产生及维持时间受到鸡群免疫应答能力、所用疫苗种类、免疫方法、免疫次数、疫病流行状况等方面的影响，良好的免疫接种不等于鸡群能够产生良好的保护力。因而通过对鸡群进行抗体监测，及时检查鸡群的免疫状态、疫苗使用效果,为制定合理的免疫程序提供依据就显得非常重要。通过对广大养殖户的大量调查发现,由于缺乏有效的监测手段,养殖户普遍存在盲目免疫的现象。因此,建立合理的抗体监测制度，开展免疫抗体监测工作，已经成为我们当前养鸡生产中急需开展的一项重要工作。下面将抗体监测所需设备及监测过程向大家做一说明.
一、实验用设备：ﻫ1、离心机　1台*(３０00转　离心红细胞）
2、冰箱 1台＊(存放抗原）
3、振荡器　1台＊（振荡9６孔V型板）ﻫ4、抗原 新城疫（ND)、减蛋（EDＳ)、流感(AＩ)抗原，从正规厂家进。
５、96孔Ｖ型板 稀释血清 清洗后可重复使用
6、八道移液器 1把（5-50微升 稀释血清)ﻫ7、吸头　和八道移液器配套使用，清洗后重复使用）
8、积液槽 配制4个单位抗原及盛放生理盐水加样用
９、一次性采血管 采血用ﻫ1０、2毫升注射器 采血用ﻫ1１、红细胞 非免疫鸡心脏采血或免疫鸡也可，但需离心5次后使用.
12、柠檬酸三钠 %抗凝剂用ﻫ13、重铬酸钾 配制清洁液用ﻫ14、硫酸 配制清洁液用
15、吸管　1毫升、1０毫升ﻫ１６、吸耳球　和吸管配套使用ﻫ17、针头 9＊13（采雏鸡）、9＊２５（采大鸡)
18、蒸馏水 当地买。清洗９6孔Ｖ型板、吸头用
19、１0毫升离心管　离心红细胞用 （塑料制）　
２０、生理盐水 做血清稀释液用、配制4单位抗原
红细胞凝集试验HA与红细胞凝集抑制试验HI
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红细胞凝集试验HA与红细胞凝集抑制试验HI
二、实验前的准备:
１．抗原:从指定厂家购买稳定浓缩抗原.
2．抗凝剂的配制:用天平称量３．8克柠檬酸三钠,溶入10０ml生理盐水中,．１%红细胞悬液：由鸡心脏或翅静脉采血,放入加有抗凝剂的离心管内（按抗凝剂：全血=1：2的比例),迅速混匀。在离心机中以3000转/分离心５分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加生理盐水，慢慢混合均匀，再在离心机中３000转/分离心５分钟，弃去上清液,再加生理盐水混匀,如此反复离心4～5次,最后一次离心后的红细胞，弃去上清液，即为红细胞泥。放入4℃冰箱中可保存2-3天。,然后加入9。9ｍl的生理盐水，此即1%。ﻫ4。被检血清:每只鸡心脏或翼下采血0。5-１ｍl,静置或离心，待血清析出后备用。：使用1%的稀硫酸溶液。水１0公斤,硫酸100毫升，将硫酸慢慢倒入水中，不断搅拌,操作时必须戴手套,口罩。ﻫ6。9６孔V型板和微量滴头清洁液的配制：重铬酸钾79克,水1０00m