荧光荧光显微镜和荧光分光光度计.ppt

荧光荧光显微镜和荧光分光光度计
第一页，共40页
1 荧光和荧光素
利用较短波长的光(激发光)照射样品，使样品受到高能量激发，产生较长波长的荧光(发射光)，用来观察和分辨样品中产生荧光的物质的成分和位置。
第二页，共40页
第三页，共40页
2 常见荧光素：
（1）异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)
（2）四乙基罗丹明 (rhodamine, RB200)
（3）四甲基异硫氰酸罗丹明
(tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC)
（4）镧系
 
（5）藻红蛋白（P-phycoerythrin，PE）
（6）多甲藻叶绿素蛋白 （peridinin chlorophyll protein，
PerCP）
（7）碘化丙啶（ propidium iodide，PI）
第四页，共40页
第五页，共40页
第六页，共40页
3 合适荧光素的选择：
具有与蛋白质形成共价键的化学基团。  
荧光效率高，标记后下降不明显。
 荧光色泽与背景色泽对比鲜明。  
标记后能保持生物学活性和免疫活性。
标记方法简单、快速。 
安全无毒
第七页，共40页
4 荧光显微镜（fluorescence microscope）
荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源 、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。
光源
滤光片
光路
聚光器
镜头
图像采集系统
第八页，共40页
荧光光源：高压汞灯、氙灯或卤素灯

滤色系统：
激发滤色片：置于光源与物镜之间，用于选择激发光范
围，只有能激发荧光染料发光的特定波长
的光通过。
阻挡滤色片：物镜和目镜之间，选择性通过特异的荧
光，呈现专一的荧光色彩。
第九页，共40页
透射光：照明光线从标本下经聚光器透过标本进入物镜。
落射光：照明光线从标本上经垂直照明器落射到标本，经标本反
射进入物镜。
透射荧光显微镜光路(a)
落射荧光显微镜光路(b)
光路
第十页，共40页