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SOD测定方法
SOD测定方法
SOD测定方法
超氧化物歧化酶（Sｕperｏｘｉde　dismutasｅ，简称ＳＯD)的测定方法
20０9年１２月08日　1６:17
法适用于以各类鲜活的动植物组织器官及初加工品(如生鱼片、动物血等初加工肉制品）、乳制品、各类水果蔬菜、果汁等食品中超氧化物歧化酶活性的测定。
超氧化物歧化酶是催化以下反应的金属酶,ﻫﻫﻫ
测酶活方法很多，本文介绍氮蓝四唑法与连苯三酚自氧化法。
（一）氮蓝四唑法ﻫ1. 方法提要
在电子供体如甲硫氨酸存在下，核黄素受光激发，与电子供体反应被还原。在氧气中,还原的核黄素与氧化反应产生ﻫﻫ,ﻫ
将无色（或微黄)的氮蓝四唑还原为蓝色的不溶性僭　,SOＤ通过催化
歧化反应,生成O２与Ｈ２Ｏ2，从而抑制蓝色形成。按抑制蓝色特形成的５0%为一酶活单位。酶活力越高，抑制50％。 仪器
荧光灯管。。.　试剂ﻫ（1）磷酸氢二钾（Ｋ2HPO４·3H２O）,磷酸二氢钾(KH2PO4），甲硫氨酸（Met），氮蓝四唑(NBT）,核黄素,乙二胺四乙酸(EDTA）,以上试剂均为分析纯级;所用水为离子水或同等纯度蒸馏水。
（2）pH7。8，　５．0×10—２mol／L的K2HPO4—　KH2PO４缓冲液（于冰箱中保存)。
4. 测定步骤ﻫ(１)酶液的制备：称取5～10ｇ样品，加预先在冰箱中放置的上述K2HPO4- ＫＨ2PO4缓冲液，缓冲液的量为所用样品的1０倍以上,在4℃条件下或冰浴中研磨成匀浆，四层纱布过滤,滤液经4０00r／min离心20min,取上清液用于酶活测定。
（２）酶反应酬体系液的制备：取上述K2HPO4— KH2ＰO4缓冲液30ml,依次溶入Met，ＮBT，核黄素与ＥDTＡ,使它们的浓度分别为1。３×10-2mｏl/L， ×1０-5mol／Ｌ, 1．3×１0—6mol/L与1×１０—4moｌ/L，放冰箱中避光保存。