表达鸭肝炎病毒VP0蛋白重组鸭瘟病毒的构建.pdf

分类号 学校代码 10233
密级 公开 学号 102334819





硕士研究生学位论文

题 目: 表达鸭肝炎病毒 VP0 蛋
白重组鸭瘟病毒的构建
学科门类: 理学
一级学科: 生物学
二级学科: 微生物学
研究方向: 应用微生物
研 究 生: 刘柏含
指导教师: 弥春霞
答辩日期: 2017 年 6月 8 日
摘要
鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH)由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus，
DHV)引起雏鸭发病的烈性传染病，该病潜伏期短、死亡率高，是造成养鸭业经
济损失的重要疾病之一
鸭病毒性肠炎（Duck viral enteritis，DVE）别名鸭瘟( Duck plague，DP )，
是由鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus，DEV)引起禽类致病的急性败血性传染病，
该病主要特点是消化器官受损和实质器官的退行性病变。此病于 1957 年在我国
初次爆发，随后全国大范围的流行对养鸭业造成了极为严重的经济损失。
本研究以实验室保存的 pET30a 载体，针对 DHAV-1 VP0 基因进行设计引物
并对 VP0 基因进行扩增，成功构建 pET30a-VP0 载体并进行蛋白的表达及纯化。
纯化后的蛋白免疫新西兰大耳兔，3 次免疫后采血进行免疫效价的测定，成功制
备 VP0 蛋白兔多抗血清。
运用实验室成功构建的转染粘粒拯救鸭瘟病毒系统，选用实验室保存的
pCAGGS-VP0 经过 BP 反应构建成为 pDONR-PCA-VP0，再经过 LR 反应把
PCA-VP0 表达盒重组到粘粒 2 上命名为 2-UL41-VP0，2-UL41-VP0 代替 2 粘粒
拯救表达 VP0 蛋白的重组病毒 rDEV-VP0。rDEV-VP0 在 CEF 上进行转染细胞
经过培养传代后提取病毒 DNA 进行 PCR 鉴定，成功构建重组病毒。
选取 60 羽雏鸭分组进行动物免疫效果评价试验，分为 rDEV-VP0 免疫 2 组，
DEV 攻毒对照组，DHAV 攻毒对照组，C-KCE 免疫对照组及阴性对照组。免疫
四天进行 DEV 和 DHAV 强毒的攻击。结果表明 rDEV-VP0 免疫雏鸭 4 天后可对
CSC DEV 的攻击可以达到完全的免疫保护，对 DHV 161/79 的攻击可提供 70%
的免疫保护。

关键词：鸭瘟病毒；鸭肝炎病毒；VP0 蛋白；重组病毒 rDEV-VP0



I
Abstract
Duck viral hepatitis (Duck viral he