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细菌菌落总数
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一、实验目的和要求
1、学会细菌菌落总数的测定。
2、了解水质与细菌菌落数之间的相关性。
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二、实验原理
细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。然而，在实际工作中不易做到，所以通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程度。水中细菌总数与水体受有机污染的程度成下相关，因此细菌总数常作为评价水体污染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说明水体被污染得越严重。
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三、仪器和材料
无菌培养皿、无菌试管、无菌水，无菌吸管、接种环、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体培养基、水样、培养箱、微波炉。
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四、实验内容和操作方法
（一）采集水样：取校园内河水，用无菌取水器，在距岸边5m处，取距水面10~15cm的深层水样。如果不能在2h内检测的，需放入冰箱中保存。
（二）细菌总数的测定：
1）水样稀释：按无菌操作法，将水样作10倍系列稀释。
2）选取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度。稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30和300之间。
3）吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿1mL。
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4）注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培养基（用于河水样）立即旋摇培养皿，充分混匀。方法是握住平皿，先往一个方向画圆，再朝相反方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿基于水平位置放置至固化。
5）接种河水样的培养皿，倒置于37℃培养箱中培养24h。
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操作步骤图示
振荡10min
水样
9ml
9ml
9ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
10-1
10-2
10-3
20ml
20ml
20ml
倒培养基
2×
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五、菌落计数及报告方法
（一）平板菌落数的选择
1、进行平皿菌落计数时，记下同一浓度的3个平板（或 2个）的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即为1ml水样中的细菌总数。
2、 计数时应选择菌落数在30~300/皿之间的稀释倍数进行计数，若同—个稀释度中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半时，而另—半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同一稀释度的平均菌数，供下—步计算时用。
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(二) 稀释度的选择
l、首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。
2、若有两个稀释度的平均菌落数都在30～300之
间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2，
应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小
的菌落数。
3、如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则
应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告
之。
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4、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之
5、如果全部稀释度的平均菌落数均不在30～300
之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6、菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数
报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示，
在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水样的稀释倍数。
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