生物显微技术实验报告.doc

生物显微技术实验报告
实验目的
掌握石蜡切片技术，为以后的科研中切出合格的实验装片做准备，学习植物制片过程并观察植物叶的横切面内部结构。
实验原理
石蜡切片法是通过利用锋利的刃具（切片机）将组织切成极薄的片层，且材料须经过一定特殊的处理，如固定、脱水、包埋、切片、染色等，在制作过程中，还要经过一系列的物理和化学的处理，这些处理方法可根据各种不同材料的性质要求进行合理选择。切片法虽然工序繁琐，技术复杂。
但是，它最能保持细胞间的正常的相互关系，能较好和较长时间地保留细胞的原貌，还能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存，本次实验利用的是微波石蜡切片法，微波处理是利用微波辐射使离子进行移动的一系列过程，这不仅缩短了实验的时间，而且操作简单易行，也保证了实验效率和质量。
实验仪器、材料及试剂：
仪器：微波炉、石蜡切片机、恒温箱等
‚材料：腊梅
ƒ试剂：FAA固定液、酒精（Al)、番红、二甲苯(DMB)、石蜡、树胶等
方法与操作步骤
脱水：依次使用下列浓度的乙醇脱水
50%乙醇—70%乙醇—85%乙醇—95%乙醇—100%乙醇—100%乙醇
每步两个小时。
透明：依次通过下列试剂进行透明
1、1/2无水乙醇1/2二甲苯（加少许番红粉末，对材料进行附染）两个小时
2、二甲苯两个小时
3、二甲苯一个小时
浸蜡：浸蜡步骤如下
将材料瓶中的二甲苯取出1/2，加入剩余二甲苯的体积3/2倍的石蜡液于36℃温箱中处理35小时
换用纯石蜡液于60℃温箱中处理2小时，再换一次纯石蜡液处理2小时
包埋与切片
在提前准备好的纸盒中放入少量蜡液。
片刻后放入材料，避免形成断层还要注意材料摆放的位置和方向。
及时将蜡块冷却，防治形成结晶。
修块与粘连：将多余的石蜡切除，使蜡块成为梯形；将蜡块一正确的方向粘连在枕木上。
切片：利用切片机将蜡块切成薄片。切片厚度为8～10μm，以每分钟40～50转为宜。
粘片与展片：在载玻片上滴一滴黏贴剂和一滴蒸馏水用牙签涂匀，将蜡带光面朝下固定于载玻片上，放到展片台上经加温使其充分展开。
干燥：将展好的片放于36℃温箱中干燥16小时
五、脱蜡：切片分别经过下列步骤进行脱蜡
二甲苯 30min 1/2二甲苯1/2无水乙醇 5min无水乙醇 5min 95%乙醇5min 85%乙醇 5min 70%乙醇 5min
六、染色：染色分为番红染色和固绿染色两步
1、番红染色：将载玻片放入盛有番红染液（1%番红，70%乙醇）的染缸中染色22小时
2、固绿复染：载玻片依次经过一下处理
70% 1min 85% 1min 95% 1min 固绿染液（%固绿，95%乙醇）20秒
脱水：95%1min 100%1min100%1min
透明：1/2二甲苯1/2无水乙醇1min 二甲苯1min 二甲苯
七、封片
中性树胶封片，干燥
八、镜检
将封好的装片在显微镜下观察，并挑选清晰的具有叶横切面典型结构特征的部位拍照。
结果与分析
实验结果
木